酶切法建库试剂盒，选择翌圣OnePot
翌圣OnePot系列是针对Illumina®测序平台定向研发的酶切法DNA建库试剂盒，采用高质量片段化酶，摆脱了繁琐的超声过程，同时简化了操作流程，极大的降低了建库的时间和成本。具有优秀的文库转化率与文库扩增效率。
随着NGS技术的高速发展，人们对于效率的要求越来越高，在消耗同等的时间和精力下，人们更愿意选择快速，高效的方法。
超声打断（机械法）是NGS建库中常用的DNA片段化方法之一，由于该方法过度依赖超声仪器和搭配的实验耗材，再加上耗时较长，被越来越多的客户所放弃。
翌圣OnePot系列酶切法DNA建库试剂盒，摆脱了繁琐的超声流程，操作简便化，针对不同样本(含FFPE)均可以获得高质量文库，是自动化平台建库的首选。
为什么选择OnePot代替机械法建库
一、 精简流程
合并建库方法，优化建库流程，手工操作低于0.5h，整体文库构建仅需2h，真正的高效建库。
二、 可控酶切
酶切产物片段大小只与酶切时间有关，简便可控，适用于个性化建库和自动化建库。
三、 兼容FFPE高效建库
1） 适用于不同程度降解的FFPE样本
对应上述样本建库详情
|
编号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
|
Input DNA（ng） |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
10 |
10 |
|
cycles |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
10 |
10 |
|
酶切时间 （min） |
6 |
6 |
6 |
6 |
6 |
6 |
6 |
6 |
6 |
6 |
10 |
|
浓度（ng/ul） 32ul洗脱 |
35.6 |
63.8 |
23.2 |
33.8 |
48.4 |
53.6 |
165.6 |
136.8 |
104 |
117.6 |
136 |
|
Total (μg) |
1.14 |
2.04 |
0.74 |
1.08 |
1.55 |
1.72 |
5.3 |
4.38 |
3.33 |
3.76 |
4.35 |
2）低质量FFPE样本，搭配修复试剂建库效果更佳
四、 适用范围广
适用于不同质量的痰液，腹水等微量建库样本
|
样本编号 |
642-痰液 |
640-痰液 |
666-腹水 |
637-腹水 |
642-痰液 |
640-痰液 |
666-腹水 |
637-腹水 |
|
浓度（ng/μl） |
16.3 |
53.0 |
24.6 |
8.16 |
16.3 |
53.0 |
24.6 |
8.16 |
|
Input DNA |
10 ng |
10 ng |
10 ng |
10 ng |
10 ng |
10 ng |
10 ng |
10 ng |
|
酶切时间（min） |
13 |
10 |
||||||
|
Cycles |
9 |
9 |
9 |
9 |
9 |
9 |
9 |
9 |
|
产量（μg） |
2.58 |
1.32 |
2.44 |
1.39 |
2.21 |
0.91 |
2.26 |
1.21 |
五、 精准的数据检出率
1） 标准品Horizon@HD753的检出率与实际基本无差别
|
Variant Type |
Chromosome Number |
Gene |
Variant |
Expected Allelic Frequency, % |
Chr |
position |
nt D |
102panel 1:2 |
|
SNV High GC |
chr.19 |
GNA11 |
Q209L |
5.6 |
19 |
3118942 |
A>T |
6.13% |
|
SNV High GC |
chr.14 |
AKT1 |
E17K |
5 |
14 |
105246551 |
G>A |
4.78% |
|
SNV Low GC |
chr.3 |
PIK3CA |
E545K |
5.6 |
3 |
178936091 |
G>A |
5.23% |
|
Long Insertion |
chr.7 |
EGFR |
V769_D770insASV |
5.6 |
7 |
Exon 20 insertion |
GG>GGCCAGCGTGG |
4.54% |
|
Long Deletion |
chr.7 |
EGFR |
ΔE746 - A750 |
5.3 |
7 |
55242465-55242479 |
AGGAATTAAGAGAAGC>A |
3.52% |
|
Fusion |
chr.4:chr.6 |
ROS1 |
SLC34A2/ROS1 fusion |
5.6 |
4-6 |
fusing exon 2 of SLC34A2 to exon 32 or 34 of ROS1 |
CTGGXTCTGGAGATCTGGCTGGAGTCCCAAATAA,、 CTGGXTCTGGAGATCTGG ATGATTTTTGGATACCA |
3.58% |
|
Fusion |
chr.10 |
RET |
CCDC6/RET fusion |
5 |
10-10 |
CCDC6 (EXON1) /RET (EXON12) |
TGCGCAAAGCCAGCGTTACCATCGAGGATCCAAAGTGGGAATTC |
5.86% |
|
CNV |
chr.7 |
MET |
amplification |
4.5 copies |
7 |
116312459-116340338 |
4.4 |
|
|
CNV |
chr.2 |
MYC-N |
amplification |
9.5 copies |
2 |
16080560-16087129 |
||
|
期望值 |
实际检测值 |
2）FFPE DNA标准品（Horizon HD200）
捕获建库，IGT 944K cancer panel T074V1
OnePot检测到突变率的准确性与Enzymatics相当（*红色标注为更接近预期突变）
|
clean |
all_map_reads |
map ratio (%) |
Target effective reads |
reads capture rate (%) |
Dup (%) |
Coverage (%) |
20%X depth cov (%) |
|
|
OnePot (with MaxUp II amplification mix) |
17716013 |
17674611 |
99.7663018 |
15721075 |
88.94721926 |
31.8432 |
99.9895144 |
99.48491028 |
|
Enzymatics (with KAPA HiFi Readymix) |
13805070 |
13775426 |
99.7852673 |
8147070 |
59.14205484 |
25.9288 |
99.9739449 |
99.68490276 |
|
Chromosome |
Gene |
Variant |
Expected Allelic Frequency, % |
Original base |
Mutant base |
Frequency/OnePot,% |
Frequency/Enzymatics,% |
|
7q34 |
BRAF |
V600E |
10.70% |
A |
T |
11.7180617 |
10.0371747 |
|
4q11-q12 |
cKIT |
D816V |
10.00% |
A |
T |
9.798995 |
25.2446184 |
|
7p12 |
EGFR |
ΔE746 - A750 |
1.90% |
GGAATTAAGAGAAGC |
- |
0.9146341 |
1.1053541 |
|
7p12 |
EGFR |
L858R |
2.80% |
T |
G |
3.2357907 |
3.6181678 |
|
7p12 |
EGFR |
T790M |
0.90% |
C |
T |
1.0137989 |
1.6100179 |
|
7p12 |
EGFR |
G719S |
24.50% |
G |
A |
21.8106996 |
21.4709913 |
|
12p12.1 |
KRAS |
G13D |
15.00% |
C |
T |
11.6261398 |
10.6679035 |
|
12p12.1 |
KRAS |
G12D |
6.30% |
C |
T |
3.245283 |
4.0613718 |
|
1p13.2 |
NRAS |
Q61K |
12.50% |
G |
T |
10.7090465 |
12.1263395 |
|
3q26.3 |
PI3KCA |
H1047R |
17.50% |
A |
G |
14.9758454 |
15.7051282 |
|
3q26.3 |
PI3KCA |
E545K |
8.80% |
G |
A |
9.798995 |
15.6359393 |
市场使用反馈
一、 上海某生物公司X*
实验样本：不同质量的FFPE样本
样本数目：4（两个质量较好，两个质量较差）
实验结论：针对客户提供的2个质量较好样本（样本3/4），建库产量可远高于其预期值，对于质量较差样本（样本1/2）,使用12606（H5901150）FFPE样本修复试剂可明显改善其产量，产量均可达客户需求。建议客户针对质量较差FFPE样本使用我公司12606产品进行修复后再行建库以获得更高产量。
|
Chromosome |
Gene |
Variant |
Expected Allelic Frequency, % |
Original base |
Mutant base |
Frequency/OnePot,% |
Frequency/Enzymatics,% |
|
7q34 |
BRAF |
V600E |
10.70% |
A |
T |
11.7180617 |
10.0371747 |
|
4q11-q12 |
cKIT |
D816V |
10.00% |
A |
T |
9.798995 |
25.2446184 |
|
7p12 |
EGFR |
ΔE746 - A750 |
1.90% |
GGAATTAAGAGAAGC |
- |
0.9146341 |
1.1053541 |
|
7p12 |
EGFR |
L858R |
2.80% |
T |
G |
3.2357907 |
3.6181678 |
|
7p12 |
EGFR |
T790M |
0.90% |
C |
T |
1.0137989 |
1.6100179 |
|
7p12 |
EGFR |
G719S |
24.50% |
G |
A |
21.8106996 |
21.4709913 |
|
12p12.1 |
KRAS |
G13D |
15.00% |
C |
T |
11.6261398 |
10.6679035 |
|
12p12.1 |
KRAS |
G12D |
6.30% |
C |
T |
3.245283 |
4.0613718 |
|
1p13.2 |
NRAS |
Q61K |
12.50% |
G |
T |
10.7090465 |
12.1263395 |
|
3q26.3 |
PI3KCA |
H1047R |
17.50% |
A |
G |
14.9758454 |
15.7051282 |
|
3q26.3 |
PI3KCA |
E545K |
8.80% |
G |
A |
9.798995 |
15.6359393 |
二、 上海某生物公司H*
实验样本：人gDNA
样本数目：1（不同Input以及不同酶切时间）
实验结论：1）Input DNA 500 ng/700 ng，PCR 5cycles，未文库产量 3μg左右 （酶切 12 min，文库主峰 300-600 bp；酶切 15min，文库主峰在 300-400 bp）
2）0.78×/ 0.2×双轮分选，文库产量 1 μg左右 （主峰 300 bp，文库范围 250-450 bp），可满足客户实验需求。
|
实验参数 |
1 |
2 |
3 |
4 |
|
Input DNA |
500 ng |
500 ng |
700 ng |
700 ng |
|
酶切时间 |
12 min |
15 min |
12 min |
15 min |
|
Cycles |
5 |
5 |
5 |
5 |
|
文库产量(μg) |
3.06 |
3.06 |
2.98 |
3.36 |
|
3.12 |
2.91 |
3 |
3 |
|
|
分选后产量(μg) |
0.88 |
0.9 |
0.99 |
0.96 |
|
0.97 |
1.1 |
1.00 |
1.11 |
订购详情
|
建库试剂盒 |
产品编号 |
规格 |
|
Hieff NGS® Ultima Dual-mode mRNA Library Prep Kit for Illumina® |
12301ES24/96/98 |
24/96/1000 T |
|
12199ES24/96 |
24/96 T |
|
|
12201ES24/96 |
24/96 T |
|
|
12203ES24/96 |
24/96 T |
|
|
12204ES24/96 |
24/96 T |
|
|
12205ES24/96 |
24/96 T |
|
|
12206ES24/96 |
24/96 T |
|
|
文库构建磁珠 |
产品编号 |
规格 |
|
12599ES08/56 |
5/60 mL |
|
|
12600ES08/56 |
5/60 mL |
|
|
Hieff NGS® DNA Selection Beads（Superior AMPure XP alternative） |
12601ES08/56 |
5/60 mL |
|
12602ES08/56 |
5/60 mL |
|
|
12603ES24/96 |
24/96 T |
|
|
建库接头 |
产品编号 |
规格 |
|
Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina®, Set 1/2 |
12611/12612ES02 |
48×2 T |
|
12412/12413ES02 |
96×2 T |
|
|
12414/12415ES02 |
96×2 T |
|
|
12615/12616ES04/16 |
12×4/12×16 T |
|
|
12617/12618ES04/16 |
12×4/12×16 T |
|
|
12610ES96 |
96 T |
|
|
建库模块 |
产品编号 |
规格 |
|
12608ES24/96 |
24/96 T |
|
|
12620ES24/96 |
24/96 T |
|
|
2×Super Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification |
12621ES03/08 |
24/96 T |
|
Hieff NGS® Dual-Mode cDNA Synthesis Kit |
12250ES24/96 |
24/96 T |
|
文库定量 |
产品编号 |
规格 |
|
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix |
12302ES05 |
500 T |
|
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, DNA Standard (1-6) |
12307ES09 |
6×96 μL |
|
12640ES60/76 |
100/500 T |
|
|
多重PCR定制咨询 |
||
|
NGS建库原料酶咨询 |
||
