定 义
支原体(Mycoplasma)又称霉形体,是目前发现的最小、最简单的无细胞壁的原核生物,直径大小0.1~0.3μm,该大小刚好介于细菌和病毒之间。其能通过滤膜且呈高度多形性,是哺乳动物细胞培养中相对常见且难以检测的污染物。由于能形成丝状与分枝形状,故称为支原体。
分 类
支原体(mycoplasma)是细菌中最小的一种微生物,在生物学分类中属于柔膜菌门、柔膜菌纲,又分属于不同目科属。其中研究较多的支原体目、支原体科,主要包含支原体属、脲原体属两个种属。
图1.支原体结构图
常见形态
支原体有多种形态,有球形、杆形、丝状、分支状等,通常可以在扫描电镜和透射电镜下进行观察。细胞培养上清和细胞膜是比较适宜支原体生长的;寄生在细胞表面的支原体可以穿透宿主细胞膜。
图2.支原体形态图
污染的来源
主要为细胞培养液或其成分(如培养基原料、血清和其他试剂)、实验室操作人员、细胞培养箱、液氮培养箱、空气中的粒子和气溶胶、抗生素的过度使用、密封不当的细胞培养物和污染了支原体的细胞等。
图3.易受支原体污染的来源
常见的污染支原体种类
细胞培养中95%的支原体污染主要是由莱氏无胆甾原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体、口腔支原体、发酵支原体、人型支原体这6种常见支原体引起的。
表1.污染支原体种类
S/N |
支原体 |
主要来源 |
95%常见的细胞培养污染物 |
1 |
Acholeplasma laidlawii 莱氏无胆甾原体 |
猪、牛、禽类、植物 |
是 |
2 |
Mycoplasma arginini 精氨酸支原体 |
猪、牛、绵羊、山羊 |
是 |
3 |
Mycoplasma hyorhinis 猪鼻支原体 |
猪 |
是 |
4 |
Mycoplasma orale 口腔支原体 |
人 |
是 |
5 |
Mycoplasma fermentans 发酵支原体 |
人 |
是 |
6 |
Mycoplasma hominis* 人型支原体 |
人 |
是 |
7 |
mycoplasma pneumoniae 肺炎支原体 |
人 |
\ |
8 |
Mycoplasma salivarium 唾液支原体 |
人 |
\ |
9 |
Mycoplasma bovis* 牛支原体 |
牛 |
\ |
10 |
Mycoplasma gallisepticum 鸡毒支原体 |
禽类 |
\ |
11 |
Mycoplasma synoviae 滑液囊支原体 |
禽类 |
\ |
12 |
Spiroplasma citri 螺原体 |
植物 |
\ |
污染的方式
支原体一般通过黏附在宿主上皮细胞表面,从而成为人类、动物和植物的寄生物,通过摄取宿主细胞的胆固醇等营养物质和/或代谢产生的毒素、过氧化氢等有毒物质危害人类和动植物,给细胞制剂和科研工作带来负面影响。
污染的影响
保守估计常规细胞培养中支原体污染率为15~35%,支原体污染会对细胞内代谢或生化合成过程造成影响,虽不会明显表现为造成细胞死亡,但却会严重干扰实验结果的可信度。
图4 支原体污染的危害
预防先行
切断污染源头
严格检测新引入细胞:所有新细胞株或原代分离细胞需通过支原体检测(如qPCR或LAMP法),确保阴性后方可进入培养体系。
规范实验操作:穿戴专用防护装备,定期消毒超净台、移液器等设备,避免交叉污染。
环境管控:细胞房每周紫外线消毒,每月全面清洁并配合支原体预防试剂擦拭死角,维持无菌环境。
精准清除
高效去除污染
支原体去除试剂-MycAwayTM 支原体去除试剂(1000×)40607ES通过靶向支原体DNA快速起效,3天即可显著改善污染。其低毒性设计不损伤宿主细胞,且操作简便,仅需加入培养基孵育,广谱覆盖95%以上常见支原体类型(如猪鼻支原体、口腔支原体等)。产品特点如下:
去除效果显著
支原体污染的细胞中,加入翌圣MycAway™ 支原体去除试剂(1000×),连续培养1周后,培养基颜色明显缓解(支原体污染的细胞,培养基约1天就会变黄,)显微镜观察细胞状态,结果显示细胞状态明显改善,细胞倍增时间恢复。
图5.支原体去除前后细胞状态比较
毒性低
针对无支原体污染的细胞,同时使用MycAway™ Treatment(1000×)支原体去除试剂及PBS处理细胞,24h后,分别使用CCK-8和细胞计数的方式对细胞活力和增殖进行检测,结果显示,MycAway™ Treatment(1000×)支原体去除试剂对细胞生长无显著抑制作用,毒性低。
图6.MycAway™ Treatment(1000×)支原体去除试剂细胞毒性测试结果
翌圣生物
支原体防控的全周期保障
为了构建支原体污染的全周期防控体系,翌圣生物科技以创新技术为核心,开发了覆盖“检测-清除-预防”三大维度的完整产品矩阵,为实验室提供一站式解决方案:
精准检测:支原体qPCR检测试剂盒、LAMP等温扩增试剂盒等,支持快速筛查与药典级检测,灵敏度达10 CFU/mL,满足细胞治疗产品快速放行需求。
靶向清除:MycAway™支原体去除试剂(细胞用)及环境专用消杀试剂,广谱覆盖95%以上污染支原体,3天高效起效,兼顾细胞安全性与操作便捷性。
长效防护:支原体预防试剂结合标准化操作流程,从新细胞准入、实验环境管控到设备定期消杀,多节点阻断污染传播链。
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产品应用 |
产品名称 |
货号 |
规格 |
支原体去除 |
MycAway™Treatment(1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent(支原体去除试剂) |
40607ES |
100 μL/ 1mL / 5×1mL |
支原体预防 |
MycAway™ Spray(Ready-to-use) 支原体喷雾剂(即用型) |
40605ES |
500mL / 2×500mL / 10×500mL |
MycAway 支原体预防试剂(2000×)细胞生物学 分离培养 |
40608ES |
1mL / 5×1mL |
|
MycGuard™-1 Solution(100×),for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 细胞培养箱水盘1号消毒卫士(支原体污染预防) |
40609ES |
100 mL |
|
MycGuard™-2 Solution(500×),for Disinfecting Ordinary Water Bath 水浴锅2号消毒卫士(支原体污染预防) |
40610ES |
100 mL |
|
支原体检测 (一步法快检) |
MycAway™Plus-Color One - Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原体检测试剂盒 |
40612ES |
25T / 100T |
支原体检测 (PCR) |
GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原体检测试剂盒 |
40601ES |
10 assays/20 assays |
支原体检测(qPCR) |
Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit支原体qPCR检测试剂盒(探针法) |
40618ES |
25T / 100T |
MycAway® Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit(2G) 支原体qPCR检测试剂盒(探针法)(2G) |
40619ES |
25T / 100T |