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上新 | T4 RNA Ligase 2,环状RNA研究核心酶原料

近年来,随着RNA研究的不断深入,线性RNA分子在生物学研究和治疗开发领域展现出广泛的应用潜力,例如mRNA疫苗。然而,长链线性RNA较短的半衰期限制了其有效性。环状RNA (circRNA)是一类单链闭合的环状RNA分子,与线性mRNA相比,circRNA具有稳定性高、免疫原性低、表达持久等优势,已经成为下一代RNA疗法赛道的新秀。circRNA体外环化技术是研究的关键,目前,RNA的体外环化主要通过化学合成和酶促连接(分为T4连接酶法和核酶法)两种方法实现。

 

在众多技术路线中,基于T4连接酶法的技术路线备受关注。该技术路线主要涉及到T4 DNA Ligase 1、T4 RNA Ligase 1以及T4 RNA Ligase 2这几种关键酶。值得注意的是,不同的T4连接酶在功能方面存在着显著的差异,这种差异决定了它们各自适用于不同结构的RNA连接任务。其中,T4 RNA Ligase 2在对双链RNA缺口进行连接时,展现出了极高的连接效率。

图1. T4连接酶作用原理比较[1]

 

T4 RNA Ligase 2,是一种依赖于ATP的双链RNA连接酶(double-strand RNA ligase, dsRNA Ligase),具有RNA链分子间和分子内连接活性,可连接双链RNA中的切刻,也可用于连接双链结构中RNA 3´羟基与DNA 5´磷酸基的切刻。与T4 RNA Ligase 1相比,该酶对双链RNA切刻的连接活性要明显高于对单链RNA的末端连接。

 

T4 RNA Ligase 2能够通过三步反应将相邻的3´羟基与5´磷酸多核苷酸连接起来,其机理如下:

①连接酶与ATP反应形成酶-AMP复合中间体;

② AMP脱离酶-AMP复合体,与RNA的5’-磷酸结合,形成5’端腺苷化的RNA;

③ 5’端腺苷化的RNA与3’-OH连接形成磷酸二酯键,释放AMP。

 

图2.T4连接酶结构与作用机理[2][3]

 

基于T4 RNA Ligase 2在RNA连接中的卓越性能,翌圣生物隆重推出T4 RNA Ligase 2 (Cat#14652),为您的分子生物学研究提供更高效、更稳定的工具。

 

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产品名称

货号

规格

目录价

活动价

T4 RNA Ligase 2

14652ES80

1000 U

535元

0元

 

 

活动细则:

1、活动时间:2025年2月12日-2025年2月28日

2、活动名额有限,每位客户限一套。

 

 

翌圣T4 RNA Ligase 2(Cat#14652) 性能展示

 
01

连接活性强

将Yeasen和进口Supplier N*的T4 RNA Ligase 2按照不同投入量加入体系中对dsRNA底物进行连接,结果显示其能有效连接dsRNA底物,连接效果与进口Supplier N*相当。

 

图3. T4 RNA Ligase 2连接效果验证
注:20 μL反应体系中包含终浓度为20 μM的dsRNA连接底物

 

02

无核酸外切酶、切口酶、RNase酶残留

将100 U T4 RNA Ligase 2分别与核酸底物一起孵育,琼脂糖凝胶电泳比较谱带变化。结果显示翌圣3个批次的T4 RNA Ligase 2均无核酸外切酶、切口酶、RNase残留。

 

图4. T4 RNA Ligase 2核酸外切酶、切口酶、RNase残留检测结果

 

 

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产品定位

产品名称

货号

质粒线性化

BspQI GMP-grade

10664ES

Bsa I GMP-grade

10661ES

模板去除

DNase I GMP-grade

10611ES

体外转录

T7 RNA Polymerase GMP-grade

10625ES

Pyrophosphatase,Inorganic GMP-grade

10620ES

Murine RNase inhibitor GMP-grade

10621ES

mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade

10614ES

mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase GMP-grade

10612ES

RNA环化

T4 RNA Ligase 1

14651ES

T4 RNA Ligase 2

14652ES

RNA纯化

RNase R GMP-grade

14615ES

 

参考文献:

[1]Obi P, Chen Y G. The design and synthesis of circular RNAs[J]. Methods, 2021, 196: 85-103.
[2]Easey A. Synthetic Biology Methods to Optimise T4 RNA Ligase Activities[D]. University of East Anglia, 2018.
[3] Viollet S, Fuchs R T, Munafo D B, et al. T4 RNA ligase 2 truncated active site mutants: improved tools for RNA analysis[J]. BMC biotechnology, 2011, 11: 1-14.

 

 

 

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