动植物组织RNA稳定液是一种用于稳定并保护采集样本内RNA的无毒溶液,可迅速渗入组织,灭活内源RNase,从而避免RNA降解,保持样本中RNA的完整性。
动植物组织RNA稳定液可以保存哪些样本?
该产品适用于多种脊椎动物样本,包括脑、心、肾、脾、肝、睾丸、骨骼肌、脂肪、肺和胸腺,对大肠杆菌、果蝇、组织培养细胞、全血细胞和一些植物也有效。
动植物组织RNA稳定液在不同温度下的保存时间?
保存条件:
37°C 下可稳定1天
25°C 下可稳定1周
4°C 下可稳定1个月
-20°C或-80℃ 长期保存
动植物组织RNA稳定液的使用方法
A. 动物组织:RNAsafe稳定液不会破坏动物组织结构的完整性。
处理过程:将组织切成合适大小后(≤0.5 cm),然后加入5倍体积RNAsafe。
注:已浸入RNAsafe的组织经平衡一段时间后,可从溶液中取出,切成更小的组织块(≤0.5 cm大小),再重新放回RNAsafe。
某些组织(如骨头)具有比较弱的液体渗透性,不适合用本品进行RNA保护。
B. 植物组织:本品对于柔软的植物组织(如嫩叶,嫩茎)可直接渗透,且达到理想的RNA保护效果。
处理过程:将组织切成合适的大小(≤0.5 cm)后,加入5倍体积的RNAsafe稳定液。
注:某些植物组织天生具有的屏障(如叶子表面的蜡层)可阻碍RNAsafe渗透,对于此类组织,往往需要破坏这些屏障层以允许溶液的浸透。
C. 组培细胞、白细胞等:按照标准实验操作收集细胞沉淀(用PBS清洗1-2次)。之后加入5~10倍体积的RNAsafe。
D. 酵母:离心弃上清,收集约108个细胞(12,000g,2 min)。加入0.5~1 mLRNAsafe。
长期保存:应置于RNAsafe中,4℃放置1小时。然后离心弃上清,收集酵母细胞(12,000g,5 min),-80℃保存。
使用动植物组织RNA稳定液的注意事项
A. -80℃保存:样品结冻保存。对于归档的样本,建议-80℃保存。该保存条件下,样本可长期保存,保护效果最佳。
操作过程:样本4℃浸透过夜,然后再转移至-80℃。
如果中间需要做样本的融化,建议取出4℃浸透过夜的组织或离心收集细胞,然后再冻存于-80℃。RNAsafe保护后的样本抽提RNA时,可直接放在室温融化,之后重新冻上,不会造成RNA量的严重损失或者RNA完整性的明显破坏。
B. -20℃保存:同样适用于归档样本的保存。样本不会在-20℃结冻,但可能会形成结晶。该保存条件下,样本可长期保存,不会对后续RNA分离造成影响。
操作过程:样本4℃浸透过夜,然后再转移至-20℃。RNAsafe保护后的样本抽提RNA时,可直接放在室温融化,之后重新冻上,不会造成RNA量的严重损失或者RNA完整性的明显破坏。
C. 4℃保存:大部分样品放到RNAsafe中,可稳定保护1个月,不会有明显的RNA降解发生。
D. 25℃(室温)保存:建议低温环境保存。若条件不允许,请将RNAsafe稳定液于冰上冷却几个小时,然后将样品浸入此溶液中,室温稳定保存1周,不会有明显的RNA降解发生。
E. 37℃保存:纯化的RNA样本于37℃孵育24 h,结构依然完整。
使用动植物组织RNA稳定液保存的样本如何做RNA提取?
因RNAsafe灭活RNase的过程是可逆的,受保护的样本使用前务必不要清洗掉RNAsafe。
A. 组织样本:用灭菌镊子从RNAsafe中取出组织块,然后用干净的吸水纸吸掉表面液体。之后立即置于裂解液中匀浆。
B:细胞样本:由于RNAsafe密度较大,此时需要使用大于普通介质的离心力。一般来说,保存在RNAsafe中的细胞能承受更高的转速,并维持细胞的完整性。大部分细胞可通过5,000g,5 min离心收集沉淀。
注意:由于不同细胞承受离心力会有差异,建议先用少量的细胞进行离心速度承受性的测试。
C. 抽提RNA:按照RNA抽提Protocol进行即可。
测试数据展示
实验结论:37℃ 1天、25℃ 7天、4℃ 30天、-80℃ 30天保存的细胞采用翌圣组织细胞RNA提取试剂盒(Cat#19221)提取RNA,RNA浓度高,纯度好,条带完整清晰,28S:18S>2:1,完整性非常好,且没有DNA残留。
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