随着蛋白质科学的飞速发展，蛋白纯化技术在生物研究领域和生物技术工业中的重要性日益凸显。这一核心技术涉及利用基因工程方法，将目标蛋白的编码信息整合入宿主细胞，从而诱导它们高效地生产所需蛋白。随后，通过一系列精细的体外操作步骤实现对蛋白质的高纯度提取。蛋白纯化使得科学家能分离出单一类型的蛋白质，这对于深入研究蛋白质的结构与功能、开发新药、进行疾病诊断以及推动生物技术的应用至关重要。该技术不仅确保了科学实验的准确性，还为生命科学领域的发展提供了持续的动力。

图1.亲和层析原理图^[1]

 

在蛋白质工程领域，融合标签作为一种强大的工具，通过与目标蛋白结合以促进实现各种实验目的，常见融合标签的功能可参考下表。然而，一旦这些标签在完成其初始辅助功能后继续残留在融合蛋白上，可能会对后续实验造成不良影响，如干扰动物免疫实验或影响蛋白的生物学活性。因此，去除这些不再需要的融合标签变得至关重要，以确保蛋白质的正常功能和实验的准确性。

 

表1.常见融合标签功能及酶切手段介绍

融合标签	大小(KD)	功能	常见酶切手段
His	0.84	有利纯化，能纯化可溶性/包涵体蛋白。	TEV蛋白酶
Flag	1.01	融合FLAG标签的目的蛋白，可以被抗FLAG的抗体识别，从而通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG标签的融合蛋白进行检测、鉴定。	肠激酶
GST	26	增强蛋白可溶性，仅能纯化可溶性蛋白，屏蔽毒性蛋白。	凝血酶
MBP	44.4	增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白。	TEV蛋白酶
NusA	55	增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白。	凝血酶
SUMO	11.2	增强蛋白的可溶性，促进蛋白折叠，保护蛋白免受蛋白酶水解，提高蛋白的稳定性。	SUMO酶

 

今天，我们隆重向您推介一款高效精准去除融合标签的尖端产品——UCF.ME^® rTEV Protease，凭借其简洁易操作的实验流程，此款酶能够便捷地从融合蛋白中切除无需的标签，进而获得高纯度的目标蛋白。

 

UCF.ME^® rTEV Protease

TEV Protease 是一种广泛应用于切除重组蛋白融合标签的蛋白酶，以其高度的位点特异性而著称。它严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，在谷氨酰胺和甘氨酸或丝氨酸之间进行精确剪切，其中最常见的七氨基酸序列为：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。这种特异性确保了蛋白加工过程中的精确性和效率。

图2.TEV蛋白酶作用原理图^[2]

 

翌圣UCF.ME^® rTEV Protease 是一款经过基因工程改良和精细纯化的重组蛋白酶，它不仅保留了天然TEV酶的完整功能活性，而且在更广泛的温度范围内展现出卓越的稳定性和特异性。该产品在rTEV Protease (Cat#20403)基础上进行了工艺优化，其纯度更高、活性更强、宿主gDNA残留更低，确保在实际应用中对蛋白融合标签的切割效率更高，且能有效降低引入外源物质残留的风险。UCF.ME® rTEV Protease在pH 7.0和30°C的条件下表现出最佳活性，但即使在pH 6.0-8.5、温度4-30°C的广泛条件下也保持活性，以适应不同蛋白质加工需求。值得一提的是，UCF.ME® rTEV Protease 的N端带有6×His标签，可通过Ni-NTA树脂进行高效去除，从而实现目标蛋白的精准纯化。

 

性能展示

1. 剪切效率高：蛋白标签切除更彻底

以含有UCF.ME^® rTEV Protease剪切位点的融合蛋白（3 μg）为底物，分别投入UCF.ME® rTEV Protease 10、5、3 U，在30℃条件下反应1 h，琼脂糖凝胶电泳检测剪切效果。结果显示翌圣的UCF.ME® rTEV Protease在投入量为3 U以上时，可高效剪切底物，剪切效率＞90%。

图2.UCF.ME® rTEV Protease剪切活性验证

 

2. 宿主gDNA残留低：有效降低引入外源物质残留的风险

通过对不同批次的UCF.ME® rTEV Protease进行宿主（大肠杆菌）gDNA残留检测，结果显示UCF.ME® rTEV Protease宿主gDNA残留远低于< 1copies/U。

图3.UCF.ME^® rTEV Protease宿主gDNA残留结果

 

3. 适用条件广泛：可适应不同蛋白质加工需求

通过对UCF.ME^® rTEV Protease不同条件下的剪切活性进行验证，结果显示UCF.ME^® rTEV Protease在4-30℃条件下均有较强的活性，可适配客户不同应用场景需求。

反应时间（h）	不同温度下剪切活性（%）
	4℃	16℃	21℃	30℃
1	34	58	56	85
2	58	80	78	90
3	71	99	99	99
3.5	84	99	99	99

 

翌圣融合标签切割蛋白产品推荐

产品分类	产品名称	产品货号
TEV蛋白酶	UCF.ME® rTEV Protease	20427ES
肠激酶	Enterokinase, Recombinant	20395ES
SUMO蛋白酶	SUMO Protease	20410ES
3C Protease	3C Protease	20409ES
凝血酶	Bovine Thrombin,High Specific Activity,>2000 IU/mg 牛凝血酶	20402ES

参考文献：

[1] Parikh I , Cuatrecasas P .Affinity Chromatography[J].Vox Sanguinis, 1972, 23(1-2):141-146.DOI:10.1159/000466530.

[2] Paththamperuma C, Page R C. Fluorescence dequenching assay for the activity of TEV protease[J]. Analytical biochemistry, 2022, 659: 114954.