多重PCR建库技术一览

多重PCR建库技术在微生物检测中的应用

16S rRNA扩增子测序技术是微生物群落多样性检测最常用的组学技术之一，该技术无需对微生物分离培养，直接提取样本里面所有微生物的基因组，利用合适的通用引物扩增16S rDNA/18S rDNA /ITS等高变区或其他功能基因，采用高通量测序仪Miseq、Hiseq或Novaseq对其进行测序，通过生物信息学分析可以获得特定实验样品中细菌、真菌或古菌等的物种组成、物种丰度、系统进化、群落比较等诸多信息。

多重PCR建库技术在动植物检测中的应用

在传统植物育种中，遗传变异是通过视觉选择进行鉴定。随着分子生物学的发展，分子标记辅助育种解决了传统利用表型筛选的作物育种方式成本高，周期长，费时费力的问题，逐步从“经验育种”走向“精确育种”。基于多重PCR和基于目标区域基因组序列液相捕获精准定位SNP/INDEL基因型分型测序技术，将位点选择高灵活性、样品数量灵活性、高通量、高灵敏度、低成本多项优势有效结合，实现对全基因组上特定基因位点变异的高通量靶向筛查。

多重PCR靶向捕获测序可用于对植物种群中的遗传多样性进行分析。通过选择性引物捕获特定基因组区域并对多个样本进行测序比较,可以研究不同品种或种群中的遗传差异和多态性,为植物种质资源的保护和利用提供重要的分子标记信息。

多重PCR技术可以针对多种植物病原真菌、细菌、病毒、线虫等进行靶向检测，对病害的流行预警、溯源和防控管理等具有重要作用。

多重PCR建库技术在疾病研究及相关检测中的应用

临床肿瘤基因检测主要有家族遗传性肿瘤检测（检测胚系基因突变）、肿瘤组织体细胞基因突变检测（肿瘤分子分型、用药指导等）、游离DNA基因突变检测（肿瘤动态监测，耐药评估等），肿瘤样本靶向NGS分析的建库方法主要有两种：杂交捕获法和扩增法。泛生子一步法扩增建库技术（中国发明专利ZL201710218529.4)，利用特定引物通过一步PCR扩增，结合生物信息算法分析，可检测多种类型的变异信息，包括点突变、小片段插入/缺失、拷贝数变异、基因融合变异、甲基化修饰和RNA表达量变化等。除用于多种靶向药基因突变进行同时鉴定以指导用药之外，对于微量DNA信号的特异性放大能力在cfDNA检测及血液肿瘤治疗后微小残留病（MRD）的鉴定等领域也具有极大的优势。