解决方案 | 肿瘤诊治新篇章：翌圣NGS技术助力精准医疗
肿瘤精准医疗
中国的癌症发病率和死亡率一直在上升，自2010年以来，癌症成为主要的死亡原因，也是中国的一个主要公共卫生问题，每年恶性肿瘤所致的医疗花费超过2200亿。随着越来越多的肿瘤早筛、伴随诊断产品被NMPA批准，更多的省份将肿瘤分子诊断技术纳入医保，更多的肿瘤患者将得益于分子诊断技术的辅助治疗，未来肿瘤患者生存率将与发达国家不断缩小。
肿瘤伴随诊断NGS解决方案
翌圣DNA文库制备产品方案
机械法 DNA 建库试剂盒
Hieff NGS® DNA Library Prep Kit（Cat#13577）
优异的捕获数据质量
不同样本不同品牌建库产量及下机数据对比测试
分别利用cfDNA、NA12878人类基因组 DNA 标准品、FFPE DNA为模板，其中cfDNA、NA12878样本投入量为30 ng，FFPE DNA投入量为50 ng，13577与竞品试剂在3种样本上建库，捕获panel为何因Cancer SLC Panel，结果显示：13577产量最优，下机数据捕获率、平均捕获深度和supplier I品牌相当，且与3家竞品试剂相比，13577 Dup值最低。
机械法 DNA 建库试剂盒搭配 FFPE 修复试剂
Hieff NGS® FFPE DNA Repair Reagent（Cat#12606）
修复试剂 12606 搭配 13577 建库试剂盒文库产量测试数据
选择7种不同类型的FFPE样本，每个样本实验分成两组，分别为末修环节不添加FFPE修复试剂和添加FFPE修复试剂，模板投入量为50 ng，PCR循环数为8，构建好文库后直接进行上机测序。
加修复试剂能提高不同质量FFPE样本的建库产量
加修复试剂对文库产量的影响
加FFPE修复试剂的文库产量更高，文库产量提升大约在10-200%。
酶切法建库试剂盒
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3（Cat#12194）
极低的假阳性率
NGS建库引入的假阳性问题主要包括嵌合序列和碱基错掺等因素，在酶切法片段化时将会引入一些假的嵌合序列，12194对片段化酶全面升级，解决了酶切假阳性的痛点。
用12194酶法片段化建库试剂盒对3种标准品样本（FFPE标准品、gDNA标准品、ctDNA标准品）建库，并和竞品W进行了头对头的比较。数据显示，无论是FFPE样本、gDNA、还是ctDNA，12194的Soft Clip、false chimeric都低于或近似于竞品W。
多重扩增靶向测序以超多重PCR为基础，通过对目标基因组区域进行引物设计及PCR扩增，富集靶向区域。
多重扩增靶向测序
多重扩增靶向测序以超多重PCR为基础，通过对目标基因组区域进行引物设计及PCR扩增，富集靶向区域。
2×Hieff® C2P4 Blood Direct Multiplex PCR Master Mix（Cat#13606）
良好的均一性
不同投入量的FFPE样本进行多重PCR建库，分别用两个扩增子引物池进行一轮扩增，202对引物和530对引物，插入片段在200-300 bp，在相同的扩增循环数和测序数据量，13606相较于竞品A有更好的均一性。
肿瘤转录组测序
FFPE 样本的 rRNA 去除
Hieff NGS® MaxUp Human rRNA Depletion Kit （rRNA & ITS/ETS）（Cat#12257）
不同样本rRNA去除效率高，rRNA残留率低
分别以1μg 人、小鼠、大鼠总RNA为样本，Hieff NGS® MaxUp Human rRNA Depletion Kit （rRNA & ITS/ETS）（12257ES24/96）去除试剂盒去除rRNA后建库，测序获得rRNA残留数据。
人珠蛋白去除
Globin mRNA Depletion Probe (Human)（Cat#12806）
良好的Globin去除性能
人血液RNA样本为模板，以不同的投入进行珠蛋白基因的去除，去除后Globin的占比几乎为零。
FFPE 样本 RNA 建库
Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit（Cat#12308）
数据产出高，文库均一性较好
不同质量FFPE样本与竞品公司的相似度（上排）与均一性（下排）对比
不同质量的FFPE样本的RNA文库测序得到的结果进行文库分析，与竞品公司的文库测序结果相似性高，数据的均一性更好。
肿瘤早筛NGS解决方案
肿瘤转录组测序
甲基化转化
Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit（Cat#12225）
产品优势
转化率高：DNA样品中未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶的转化率高达99.5%以上；
完整度好，回收率高：DNA降解程度低，转化后样本完整度好，DNA样品的回收率高达55%以上。
human gDNA不同投入量进行亚硫酸氢盐转化，样本中参入1%λDNA和0.5% PUC19DNA，12225ES的转化率＞99.5%，DNA的回收率＞55%。
酶法甲基化转化原料
TET/T4-BGT/APOBEC
为解决亚硫酸氢盐转化的痛点，翌圣生物基于自主生物专利技术，使用定向进化技术获得了高活性的TET/T4-BGT/APOBEC，这三种酶可应用于EM-seq酶法转化。
cfDNA 以10 ng和200 ng的样本起始量并参入1% λDNA和0.5%pUC19 DNA进行甲基化转化和甲基化建库（Cat#12221ES），同时采用亚硫酸氢盐转化作为对比（Cat#12222ES）, 结果显示：TET2/T4-BGT酶氧化效率≥99%，APOBEC酶的脱氨效率≥99%，转化率与亚硫酸氢盐转化相当，均能达到预期的效果。
DNA 甲基化建库
甲基化单链建库
Hieff NGS® Methyl-seq ssDNA Library Prep Kit for Illumina® V2（Cat#12221）
产品优势
投入量低：可满足10 pg~250 ng起始量的样本建库；
数据质量佳：不同样本类型及不同投入量条件下均表现出优异的数据质量；
操作简便：2小时左右可以完成建库。
以gDNA、cfDNA、FFPE DNA为模板，先进行重亚硫酸盐转化，再进行建库。转化试剂盒：DNA甲基化亚硫酸盐转化试剂盒（ Cat # 12222ES）；和竞品对比，本试剂盒文库产率要比竞品高。在测序数据方面Mapping ratio(%)比竞品略高，dup ratio(%)和竞品相当。
甲基化双链建库
Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®（Cat#12214）
产品优势
所有组分均通过质量控制和功能验证，以确保文库的稳定产出；
支持多种类型DNA样本，包括gDNA、cfDNA和FFPE等；
兼容10 ng-1000 ng DNA的样本投入量，并兼容市面主流的转化方案。
12214ES文库产量、数据质量优于竞品
不同样本不同投入量的文库浓度
产品订购
样本前处理
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产品应用 |
产品名称 |
产品编号 |
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化学转化 |
DNA Methylation Bisulfite Kit |
12222ES |
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Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit |
12225ES |
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Hieff® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit |
12223ES |
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甲基化转化酶原料 |
Recombinant Ten-Eleven Translocase 2.0(eTET2.0, with buffer) |
12212ES |
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T4 Phage β-glucosyltransferase (T4-BGT) (300 U/μL) |
14552ES |
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14553 Recombinant APOBEC3A (A3A) Protein |
14553ES |
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Recombinant Ten-Eleven Translocase (TET) |
14554ES |
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rRNA去除 |
Hieff NGS® MaxUp Human rRNA Depletion Kit (rRNA & ITS/ETS)（Cat#12257） |
12257ES |
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珠蛋白RNA去除 |
Globin mRNA Depletion Probe(Human)（Cat# 12806） |
12606ES |
文库建库
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产品应用 |
产品名称 |
产品编号 |
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机械法建库 |
Hieff NGS® DNA Library Prep Kit 全能型DNA建库试剂盒 |
13577ES |
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FFPE 修复试剂 |
Hieff NGS® FFPE DNA Repair Reagent |
12606ES |
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酶切法建库 |
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3一步法DNA建库试剂盒V3 |
12194ES |
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多重扩增建库 |
2×Hieff® C2P4 Blood Direct Multiplex PCR Master Mix |
13606ES |
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RNA建库 |
Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit |
12308ES |
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甲基化建库 |
Hieff NGS® Methyl-seq DNA library Prep kit for Illumina® V2 |
12221ES |
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Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina® |
12214ES |
