不会操作巨噬细胞清除剂？看这篇就够了！内附文献解读~
巨噬细胞清除剂产品简介
巨噬细胞是免疫系统中的一种重要细胞，它们在组织中扮演着多种角色，包括病原体清除、组织修复、免疫调节等。在某些病理条件下，如慢性炎症、自身免疫疾病或肿瘤发展过程中，巨噬细胞的异常激活或功能失调可能对机体产生不利影响。Clodronate Liposomes 巨噬细胞清除剂（氯膦酸盐脂质体）是一类能够特异性地消耗或清除巨噬细胞的药物或化合物。氯膦酸盐脂质体是目前最为成熟、方便、经济的一种巨噬细胞清除工具，可以有效的清除动物体内包括肝脏，脾脏，肺部，血液等多个不同组织和部位中的巨噬细胞，也是目前使用最广泛的一种巨噬细胞清除的方法。
常见应用方向文献实例
脂肪组织
文献来源：PMID 21931688
文献旨在探讨肥胖相关的脂肪组织炎症，特别是脂肪组织中浸润的巨噬细胞，是否是胰岛素抵抗和2型糖尿病发展的原因。
小鼠品系：C57BL/6J 雄性小鼠。
实验方法：通过用普通饲料和高脂肪饲料分别喂养小鼠，将小鼠分为正常饮食和高脂饮食（DIO）两组。对高脂饮食小鼠分别注射clodronate liposomes和PBS liposomes（对照组），在第一次注射后的6至7天进行实验。
注射方式：静脉注射。
注射剂量：注射巨噬细胞清除剂两次，剂量约110 mg/kg，中间间隔三天。
检测方法：代谢参数检测(小鼠的血糖、血浆胰岛素水平、肝脏重量和甘油三酯含量)、高胰岛素-正常血糖钳夹实验、组织学检查、RT-qPCR等。
实验结果：该研究表明通过减少内脏脂肪组织中的巨噬细胞可以改善DIO小鼠的代谢状况和胰岛素敏感性，这部分可以归因于adiponectin水平的增加。
图1. 氯膦酸脂质体对DIO小鼠脂肪中巨噬细胞消耗的影响
肝脏
文献来源：PMID 31996460
文献作者通过小鼠腹腔注射clodronate liposomes清除巨噬细胞，并在缺血-再灌注损伤（IRI）前通过尾静脉注射骨髓源性巨噬细胞，以此来研究巨噬细胞在肝脏IR损伤中的作用及其潜在的分子机制。
小鼠品系：6-8周龄的雄性C57BL/6小鼠。
注射方式：腹腔注射。
注射剂量：400 μL/只。
给药方式：注射clodronate liposomes后，为避免小鼠感染，喂食小鼠含有氨苄西林（Ampicillin，1 mg/mL）的饮用水直到小鼠死亡。
检测方法：注射clodronate liposomes 48小时后使用免疫组织化学（图2-A）和流式细胞仪（图2-G）进行检测。
实验结果：
图2.Roquin-1对肝脏IR损伤的影响
肿瘤
文献来源：PMID 31933479
文献作者通过腹腔注射clodronate liposomes的方式，根据以往的研究和实验设计确定的特定剂量和频率清除小鼠体内的巨噬细胞，以此来研究巨噬细胞对肿瘤转移的影响。
小鼠品系： NSGs 小鼠。
注射方式：腹腔注射。
注射剂量：每周三次，每次6.5 mL/g。
检测方法：生物发光成像（BLI）、免疫荧光、RT-qPCR等技术。
实验结果：使用clodronate liposomes清除巨噬细胞，观察到在原位移植的MYC/Twist1-HCC小鼠中，肝脏和肺部的转移灶数量显著减少，表明巨噬细胞在肿瘤转移过程中起到了重要作用。
图3.Twist1通过巨噬细胞依赖机制诱导MYC-HCC转移
胚胎小胶质细胞
文献来源：PMID 29559892
文献探讨在大鼠胚胎子宫内给予针对小胶质细胞（microglia，一种脑区巨噬细胞）的药物，对于改善由巨细胞病毒（Cytomegalovirus, CMV）感染的大鼠胎儿大脑的神经发育结果的影响。
小鼠品系：Wistar rats（RCMV-1 145-147-gfp）。
注射方式：雌性大鼠子宫内胚胎脑室注射。
注射剂量：0.5 µL/injection。
给药方式：在胚胎第 15 天时，实验组同时注射巨噬细胞清除剂（0.5 µL/injection）的和rat CMV（1.75×103 pfu），对照组注射注射含磷酸盐缓冲盐水（PBS）的脂质体（0.5 µL/injection），并在大鼠整个妊娠期间服用多西环素（200 mg/kg饲料)。
检测方法：免疫组化、组织透明化、流式细胞术、共聚焦显微镜、RT-qPCR等技术。
实验结果：使用氯磷酸盐脂质体耗竭小胶质细胞和母体摄取多西环素治疗均与显著提高生存率、改善增重、改善感觉运动发育和降低癫痫发作风险相关。
图4.氯膦酸脂质体可消耗小胶质细胞并减少 CMV 在发育中大脑中的传播
胃肠道
文献来源：PMID 36263186
文献研究旨在探讨TMP195（一种选择性IIa类组蛋白去乙酰化酶HDAC抑制剂）在结直肠癌（CRC）治疗中的作用及其机制。考虑到HDAC与癌症的密切关系，以及IIa类HDAC抑制剂与免疫功能的关联，研究者们特别关注了TMP195对M1型巨噬细胞极化的影响，以及它与PD-1阻断疗法联合使用的潜在治疗效果。
小鼠品系：C57BL/6。
注射方式：腹腔注射。
注射剂量：200 µL/次。
给药方式：在MC38细胞接种前两天开始注射，每三天一次，每次200 µL，直至小鼠死亡。
检测方法：结肠炎相关大肠癌模型、流式细胞仪、组织病理学和免疫染色、RT-qPCR、ELISA等。
实验结果：使用氯磷酸盐脂质体部分耗竭巨噬细胞时，TMP195的抗肿瘤效果消失，表明TMP195的疗效可能依赖于巨噬细胞。
图5.巨噬细胞消耗可削弱 TMP195 对结直肠癌的治疗效果
图6.流式细胞术检测 M1 巨噬细胞和 T 淋巴细胞的浸润情况
脑内小胶质细胞
文献来源：PMID 30980832
文献探讨了在大鼠模型中，创伤性脑损伤（TBI）后立即耗竭小胶质细胞对细胞和行为病理学的影响。
小鼠品系： Sprague-Dawley rat。
注射方式：颅内注射。
注射剂量：10 µL。
给药方式：
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术前麻醉：用异氟醚（5%诱导，1-2%维持）麻醉动物，拆除缝线，重新打开切口，清洗头骨，将动物放入立体定向头架。
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钻孔：在颅骨上钻一个毛刺孔，用 10 μL Hamilton® 80000 1701N 注射器将 10 μL脂质体悬浮液（脂质体大小 = 2 μm）缓慢注入大脑皮层和丘脑。
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术后操作：手术后，动物在单独的笼子里恢复至少 60 分钟，然后再放回母鼠身边。手术过程和术后恢复均在 37°C 的加热垫上进行，以保持体温。
注：文献中提到的两个注射位置的坐标点:大脑皮层(cortex)的坐标(-1.5mm AP, 1.7mm ML和 1.7mm DV)；丘脑(thalamus)的坐标(-3.5mm AP,1.7mm ML和 3.5mm DV)。坐标是根据Paxinos和Watson的第三版大鼠脑立体定位图谱来确定的。
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检测方法：神经病理学评估、电生理学检测等。
实验结果：
图7.氯膦酸盐诱导的耗竭后皮层中的小胶质细胞活化
肺泡巨噬细胞
文献来源：PMID 22110592
研究探讨了肺部缺血对肺泡巨噬细胞的影响，特别是在小鼠模型中，左肺动脉完全阻塞后，左肺与外周循环隔离，直至5-7天后新的系统血管进入肺实质。使用氯磷酸盐脂质体处理小鼠，耗竭单核细胞/巨噬细胞，并评估对血管生成的影响。
小鼠品系：C57Bl/6。
注射方式：腹腔注射+气管给药。
注射剂量：100 µL。
动物模型：
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动物准备：选择5-6周龄的雄性C57Bl/6小鼠，并按照约翰霍普金斯大学动物护理和使用委员会批准的体内协议进行操作。
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麻醉：使用2%异氟醚对小鼠进行麻醉。
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气管插管：小鼠被麻醉后，进行气管插管并连接到呼吸机（每分钟120次呼吸，每次0.2毫升）。
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左肺动脉结扎：在左侧胸腔进行侧切口。通过手术切口，找到并结扎左肺动脉。这个步骤会切断左肺的血液供应，模拟缺血状态。结扎完成后，关闭胸腔切口，拔除气管插管，并允许小鼠恢复。
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样本收集：在LPAL后的不同时间点，通过颈椎脱位的方式处死小鼠，并收集肺组织和进行支气管肺泡灌洗（BAL）。对收集的肺组织进行进一步的分析，包括细胞计数、流式细胞术分析、免疫组化和免疫荧光染色等。
给药方式：在左肺动脉结扎（LPAL）24小时前、LPAL后1、5、9天分别注射氯磷酸盐脂质体或对照PBS脂质体（长疗程），或者仅在LPAL前24小时和LPAL后24小时给予治疗（短疗程）。
检测方法：细胞流式等。
实验结果：通过流式细胞术分析，确认氯磷酸盐脂质体处理后巨噬细胞数量的减少情况。在短疗程和长疗程的氯磷酸盐脂质体处理后，观察到肺组织中总巨噬细胞数量的显著减少。
图8.LPAL 后离体左肺组织中巨噬细胞数量的变化
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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Clodronate Liposomes（From Vrije Universiteit Amsterdam）体内巨噬细胞清除剂 |
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5 mL |
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40337ES10 |
10 mL |
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