核酸电泳是进行核酸研究的重要手段，是分离、鉴定和纯化核酸的主要方法。核酸电泳一般有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖作为支持介质的一种电泳方法，常用于DNA切胶回收，DNA分离和用于佐证DNA是否重组、质粒是否切开等等，因其分离范围较广，在实验室中应用广泛。

图1.核酸电泳操作流程

电泳缓冲液是核酸凝胶电泳系统的一个重要组成，主要作用是维持合适的pH，使溶液两极的pH保持基本不变。且具有一定的导电性，利于核酸分子从负极迁移到正极。其成分及其离子强度影响物质的电泳迁移率，内含的EDTA可螯合Mg²⁺等二价阳离子，防止电泳时激活DNA酶及Mg²⁺与核酸生成沉淀，保护样本的理化性质不变。

核酸电泳缓冲液分为TAE缓冲液、TEB缓冲液、TPE缓冲液，因为双链线状DNA在TAE的迁移率较其他两种缓冲液更快，因此实验室多使用TAE电泳缓冲液。

50×TAE Buffer配制单如下表所示：（使用时需稀释50倍）

琼脂糖是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体，提取自琼脂或者含琼脂的海藻。琼脂糖的基本参数包括：硫酸盐含量、凝胶强度、胶凝点、电内渗（EEO）等。合适的琼脂糖是核酸电泳跑出好胶的重要前提，翌圣高质量琼脂糖（Cat#10208ES），胶孔清晰、胶体不易断，具备纯度高（硫酸盐含量低）、凝胶强度大、胶凝点相对高（常温条件下凝固快）、电内渗低等特点，是实验室DNA/RNA凝胶电泳的最佳选择。

严格控制琼脂糖参数，保证凝胶质量

电渗值低（EEO≤0.13)，条带分离效果好，分得开、跑得快；

图2.不同浓度凝胶电泳图

注：0.75%琼脂糖凝胶上样：1kb ladder，1%琼脂糖凝胶上样：100 bp ladder、1kb ladder、2000 DNA Marker、5000 DNA Marker，2%琼脂糖凝胶上样：100 bp ladder、2000 DNA Marker、5000 DNA Marker；上样量：Marker 原液 2 μl 稀释 5 倍后上样 10 μl；0.75%、1%、2％琼脂糖凝胶电泳程序分别为：115V，45min；130V，40 min；130V，50 min。

琼脂糖凝胶电泳必然离不开核酸染料的加持，核酸染料一般是芳香环化合物，这些化合物能够与DNA中的核苷酸发生静电作用，从而将核酸染料吸附到DNA分子表面。分子中含有的环结构可以吸收紫外线或蓝光，并发出荧光。翌圣核酸染料YeaRed/YeaGreen是油性大分子产品，不能穿透细胞膜进入细胞内，不易挥发升华，人体不会吸入，经过艾姆斯氏和相关测试表明这两种染料无明显诱变性，是集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。

琼脂糖凝胶配制对照表

DNA Marker是分子量不同的DNA片段的组合，主要用途为DNA分子凝胶电泳时，与样品共同加入凝胶中进行电泳分离，通过样品条带与DNA Marker对应条带大小及亮度的对比，可以粗略估算样品DNA分子量的大小以及在溶液中的浓度。

目前翌圣生物DNA Marker分子量大小范围覆盖了从50 bp到15 kb的DNA片段，符合绝大多数实验需求。Marker上样量通常为5-10 μL，如果大分子条带弯曲、拖尾且分不开，可以将Marker原液2 µL稀释5倍加10 µL，条带清晰不拖尾。

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