涨知识 | 克隆专题五：分子克隆转化方法
克隆技术，又称为“生物放大技术”，目前应用最广泛的技术为“分子克隆”，即通过重组技术将目的DNA片段按照人们的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生新的遗传性状的技术。
大部分的分子克隆方法，诸如传统分子克隆、TA克隆、Gatway克隆、TOPO克隆、无缝克隆等都绕不开目的片段制备、载体制备、连接、转化、筛选等等步骤。其中，转化是分子克隆的关键步骤，其目的是产生重组DNA质粒的多个拷贝。接下来小翌就具体解析一下重组质粒转化至宿主细胞的过程，为您的实验提供好方法。
转化是细菌细胞低频率吸收外界DNA的自然过程，在分子生物学实验中，用于在专门为吸收DNA而制备的“感受态”细菌内增殖质粒。在转化过程中，质粒DNA被引入到适当的菌株中，以便菌株可以复制目标序列，用于后续进一步的分析或操作。转化通常包括化学转化法和电转化法。
化学转化法（CaCl2）
①质粒DNA进入细胞；
②细胞恢复；
③细胞接种培养。
表1.感受态菌株的选择
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菌株 |
特点 |
用途 |
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DH5α |
一种常用于质粒克隆的菌株。缺失核酸内切酶（endA），提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型（recA）减少插入片段的同源重组率，保证了插入DNA的稳定性；lacZΔM15的存在使得DH5α可用于蓝白斑筛选。 |
构建克隆， 质粒提取， 蓝白斑筛选 |
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TOP10 |
TOP10生长速度快（比DH5α快），10小时可见克隆，recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 |
构建克隆， 质粒提取， 蓝白斑筛选 |
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BL21(DE3) |
用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效蛋白表达宿主，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX、pMAL等质粒的蛋白表达。 |
非毒性蛋白的表达 |
图1. 翌圣TOP10、DH5α和BL21三种感受态不同批次的转化效率稳定
图2.感受态转化流程
电击法
PEG介导法
根癌农杆菌介导法
相关产品列表
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产品定位 |
产品名称 |
产品货号 |
规格 |
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快速感受态细胞 |
DH5α Fast Chemically Competent Cell F DH5α化学感受态 |
10×100 μL |
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常规感受态细胞 |
TOP10 Chemically Competent Cell TOP10化学感受态细胞 |
10×100 μL |
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常规感受态细胞 |
DH5α Chemically Competent Cell DH5α 化学感受态细胞 |
10×100 μL |
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常规感受态细胞 |
BL21(DE3) Chemically Competent Cell BL21(DE3)化学感受态细胞 |
10×100 μL |
