上新 | 高酶活性、高稳定性能，酶法转化原料助力甲基化研究！
图1.DNA甲基化示意图
利用氧化酶（TET酶）、T4-葡糖基转移酶（T4-BGT）、脱氨酶（APOBEC酶）将未甲基化的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U），可更大程度地减少对DNA的损伤，最终产生的高质量文库。
图2.酶法转化-EM-seq的工作流程（Genome Res. 2021 Jun 17;31(7):1280-1289）
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1、转化效率高，样本损伤小；
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2、WGBS测序中，相对亚硫酸氢盐转化，EM-seq有更高的文库丰富度，可检测到更多的 CpG位点；
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3、可兼容cfDNA、FFPE DNA、单细胞DNA等样本；
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4、更少的样本投入量，可获得更高的数据质量。
利用氧化酶（TET酶）将5mC和5hmC转化为5-羧基胞嘧啶（5caC）， 吡啶硼烷将5caC转化为尿嘧啶，PCR扩增后用于测序。
图3.酶法转化-Taps的工作流程（Nat Commun. 2021 Jan 27;12(1):618.）
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1、破坏性更小、效率更高。
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2、能保留样本更多的原始信息，在DNA甲基化检测中，可同时检测基因突变和结构变异。
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3、可与多种下游分析技术兼容，包括但不限于甲基化敏感性PCR、限制性酶切、质谱、全基因组测序等
TET/T4-BGT/APOBEC
TET/T4-BGT/APOBEC酶均未检测出外切酶和切口酶残留
图4.TET酶外切酶和切口酶的残留检测
图5.T4-BGT酶外切酶和切口酶的残留检测
图6.APOBEC酶外切酶和切口酶的残留检测
TET/T4-BGT/APOBEC酶原料与对应的缓冲液，cfDNA 以10ng和200ng的样本起始量并参入1% λDNA和0.5%pUC19 DNA进行甲基化转化和甲基化建库（12221ES），同时采用亚硫酸氢盐转化作为对比（12222ES）, 结果显示：TET/T4-BGT酶氧化效率≥99%，APOBEC酶的脱氨效率≥99%，转化率与亚硫酸氢盐转化相当，均能达到预期的效果。
图7：TET/T4-BGT/APOBEC酶原料的功能检测
采用3个批次的酶原料进行功能检测，TET/T4-BGT酶氧化效率以及APOBEC酶的脱氨效率均能达到99%以上,具有良好的批间稳定性。
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批次号 |
A批次 |
B批次 |
C批次 |
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Input gDNA（ng） |
5 |
150 |
5 |
150 |
5 |
150 |
|
C convert（%） |
99.25 |
99.65 |
99.1 |
99.31 |
99.05 |
99.49 |
|
CpG methylated（%） |
1.20 |
0.60 |
1.30 |
0.17 |
0.49 |
0.54 |
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产品名称 |
产品货号 |
|
Recombinant Ten-Eleven Translocase (TET) |
14554ES |
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Recombinant APOBEC3A (A3A) Protein |
14553ES |
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T4 Phage β-glucosyltransferase (T4-BGT) (10 U/μL) |
14551ES |
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产品应用 |
产品名称 |
产品货号 |
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柱式-亚硫酸氢盐转化 |
Hieff® DNA Bisulfite Conversion Kit |
12222ES |
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磁珠法-亚硫酸氢盐转化 |
Hieff® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit |
12223ES |
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甲基化建库 |
Hieff NGS® Methyl-seq DNA library Prep kit for Illumina® V2 |
12221ES |
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甲基化建库 |
Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®双链DNA甲基化建库试剂盒 |
12214ES |
