该步骤对片段化后的RNA进行逆转录，预混版RNA建库，只需要将1st模块试剂加入片段化后的RNA即可进行PCR，而非预混RNA建库试剂盒，需要分开添加1st逆转录酶和1st逆转录酶buffer。

该步骤承接1st cDNA合成步骤进行二链互补链合成以及末修、加A等步骤。预混版RNA建库试剂盒，只需要将完成1st cDNA PCR步骤的试剂拿出，直接加入2nd 合成试剂即可进行下步PCR操作，而非预混RNA建库试剂盒，需要分开添加2nd合成buffer和酶。

该步骤承接2nd二链合成步骤，进行后续接头连接。预混版RNA建库试剂盒，只需要加入接头连接模块和接头，即可进行接头PCR过程，而非预混版RNA建库试剂盒，需要分开添加连接酶、连接buffer以及接头。