DNA-蛋白质互作研究解决方案（下）
DNA-蛋白质互作研究解决方案（上）介绍了一些表观组学技术研究DNA-蛋白质互作，但是有了组学数据，通常还需要一些验证实验。
这次，我们来介绍DNA与蛋白质互作研究的验证实验。
荧光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。
双荧光素酶实验能够进行启动子活性检测、转录因子鉴定、miRNA 与LncRNA/circRNA/mRNA互作等。
图.转录因子IRF3对IFN-β启动子的调控作用
构建Luc-IFN-β启动子载体和IRF3的过表达载体后进行共转染实验，之后双荧光素酶报告基因检测显示转录因子IRF3对IFN-β具有调控作用
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 双荧光素酶报告基因检测试剂盒HOT |
100 T/1000 T |
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Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒 |
100 T/500 T/1000 T |
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pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc荧光素酶报告基因质粒阳性对照 |
1 μg |
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Luciferase Reporter Plasmid negative control （荧光素酶报告基因质粒阴性对照） |
1 μg |
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pGMLR-CMV Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-CMV海肾荧光素酶报告基因质粒） |
1 μg |
酵母双杂交是将待研究的两种蛋白质分别克隆（融合）到酵母表达质粒的转录激活因子（如GAL4等）的DNA结合结构域（DNA-BD）和转录激活域（AD）上，构建成融合表达载体，从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。
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CoIP |
GST-pull down |
酵母双杂交 |
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原理 |
抗原抗体特异性反应 |
GST对谷胱甘肽偶联磁珠得特异性 |
真核生物转录调控过程 |
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检测瞬时相互作用 |
否 |
否 |
是 |
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检测弱相互作用 |
否 |
否 |
是 |
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检测直接相互作用 |
否 |
是 |
否 |
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验证方式 |
体内直接或间接相互作用检测 |
体外直接得相互作用检测 |
体内直接或间接相互作用检测 |
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是否需要蛋白纯化 |
否 |
是 |
否 |
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是否需要抗体 |
是 |
否 |
否 |
CoIP实验步骤
GST-pull down实验步骤
酵母双杂交实验步骤
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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蛋白A/G琼脂糖纯化树脂 |
1/2/5/25/100 mL |
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蛋白A/G琼脂糖快速纯化树脂 |
5 /25 /100 mL |
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蛋白A/G免疫沉淀磁珠 |
1/5 mL |
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GSTSep Glutathione MagBeads GST标签蛋白纯化磁珠 |
1/2/5/25 mL |
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X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷 |
25/100/250/500 mg |
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Aureobasidin A(AbA) 金担子素A |
1/5/10 mg |
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WB/IP裂解液 |
100 mL |
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蛋白酶抑制剂Cocktail |
1/10/100/500 mL |
相关实验，还有什么想了解的呢？留言区留言告诉我们吧！
