何为内参抗体、何为标签抗体？

一、内参抗体

内参即内部参照（Internal Control），类似于荧光定量实验的内参基因，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由看家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在不同组织和细胞中的表达相对恒定，常用它作为检测目的蛋白表达水平变化时来做参照物。

 

1. 内参抗体的功能：

（1）检测整个WB流程是否正常

（2）检测基因表达产物是否正确

（3）比较表达产物微量的相对变化

（4）评价各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致

2. 内参抗体的选择：

（1） 样本种属来源

l 哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、NaK、Atpase等。

l 植物来源实验样本，则可以选择plant actin、Rubisco等。

l 根据来源样本选择不同的内参，是WB实验成功的关键。也可参照文献报导，选择合适的蛋白作为内参。

（2）目的蛋白分子量

选择内参抗体时，应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5 KD以上。比如目的蛋白分子量为45 KD，此时不适宜选择β-actin（43 KD）作为内参，可以考虑选择GAPDH或者β-tubulin作为内参。

（3）内参蛋白的表达部位

图1. 不同部位内参蛋白展示图

二、标签抗体

标签抗体的组成一般分为蛋白标签和目的蛋白两部分。标签抗体的合成主要是将蛋白标签是利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。标签抗体（Tag Antibody）可用于检测和纯化各种商品化表达载体上的标签序列，分析目的蛋白的表达含量及其功能。其原理是抗原—抗体反应，这些标签抗体可以高度特异地结合对应的标签融合蛋白。

标签抗体的选择可遵循以下原则：

l 检测蛋白A+His标签，选择抗His抗体；检测蛋白B+MBP标签，选择抗MBP抗体；

标签抗体是开展基因蛋白表达、信号转导和基因功能研究的常用工具。随着技术的不断发展，相继开发得到具有各种不同功能的蛋白标签，常见的蛋白标签有His、Flag、GST、MBP、HA、Myc、GFP 等。

表1. 不同标签功能介绍

融合标签	大小（KD）	功能	是否切除
HIS	0.84	有利纯化，能纯化可溶性/包涵体蛋白	小标签，不影响蛋白功能
GST	26	增强可溶性，仅能纯化可溶性蛋白	大标签，需切除
MBP	44.4	增强可溶性，减弱毒性蛋白	大标签，需切除
NusA	55	增强可溶性，减弱毒性蛋白	大标签，需切除
SUMO	11.2	增强可溶性，减弱毒性蛋白	大标签，需切除

三、翌圣标签抗体与内参抗体
 

标签抗体

货号	名称	分子量	应用	WB稀释比例	价格（元）
30503ES20	Flag-Tag, Mouse mAb	20μl	IF,WB,IP	1:1000-1:5000	248
		100μl	IF,WB,IP	1:1000-1:5000	748
		1ml	IF,WB,IP	1:1000-1:5000	3287
		5ml	IF,WB,IP	1:1000-1:5000	13687
30401ES50	His-tag, Mouse mAb	50µl	ELISA, IF, WB, IP	1:2000-1:20000	688
30601ES60	Myc-tag, Mouse mAb	100μl	ELISA, IF, IP, WB	1:5000	748
30701ES60	HA-Tag, Mouse mAb	100μl	WB, IP	1:10000	748
30901ES50	GST-tag, Mouse mAb	50μl	ELISA, WB, IP	1:5000-50000	688

 

内参抗体

货号	名称	规格	应用	WB稀释比	价格（元）
30101ES50	β-actin, Mouse mAb	50 µl	ELISA, IF, WB, IHC, FC, IP	1:5000-50000	688
30102ES60	β-actin, Rabbit pAb	100 ul	ELISA, IF, WB, IHC	1:1000-10000	998
30201ES60	GAPDH (Clone:1A6), Mouse mAb	20 µl	ELISA, IF, WB, IHC	1:10000	738
30202ES60	GAPDH, Rabbit pAb	100 ul	WB	1:2000	588
30301ES60	β-Tubulin, Mouse mAb	100 µl	IF, WB, IHC ,IP	1:1000	948
30302ES60	β-Tubulin, Rabbit pAb	100 µl	IF, IHC, IP	1:5000-10000	748
30304ES60	α-Tubulin, Rabbit pAb	100 µl	WB, IF, IHC, IP	1:5000-10000	948

 其他常用内参类型推荐

货号	名称	分子量	品牌
细胞核膜	Lamin A/C	65-75 KD	咨询购买
	Lamin B1	66-72 KD
细胞核	YY1	65-70 KD
	TBP	33-43 KD
	Histone H3	15-17 KD
	PCNA	36 KD
胞浆或全细胞	GAPDH	36 KD
	β-actin	42 KD
	Vinculin	117 KD
	β-Tubulin	50-55 KD
	α-Tubulin	50-55 KD
膜蛋白	ATP1A1	97-110 KD
线粒体	COX412	17-20 KD
	COX411	17-20 KD
	Porin	31-37 KD
全血/血浆/血清	Albumin	66 KD

 

四、标签抗体标记的蛋白纯化产品

1. Anti-Flag亲和纯化凝胶 

    Anti-Flag亲和纯化凝胶由高质量的鼠源 IgG2b单克隆抗体与Sepharose 4B gel 通过供价偶联制备，本产品具有较高的Flag标签融合蛋白加载容量（至少为1.1mg protein/ml gel），杂蛋白非特异结合少，可用于蛋白质免疫沉淀（IP）和蛋白质纯化。

Anti-Flag亲和纯化凝胶可结合Met修饰的N端Flag融合蛋白（Met-FLAG–Protein），N端Flag 融合蛋白（FLAG–Protein），C端Flag 融合蛋白（Protein-FLAG）。

图2. Anti-Flag亲和纯化凝胶IP后蛋白电泳图

1, 国外品牌  2,Yeasen；抗体浓度：7.5mg抗体/ml凝胶；蛋白结合量：1.25mg蛋白/mL凝胶；蛋白纯度：＞95%

图3. 不同品牌Flag凝胶价格比对图

货号	名称	规格	价格
20585ES03	Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag亲和纯化凝胶）	1ml	1487
20585ES08		5ml	4797
20585ES25		25ml	20987
20585ES60		100ml	76187

2. 琼脂糖凝胶偶联标签抗体

琼脂糖凝胶偶联标签抗体由高质量的鼠源单克隆抗体与Sepharose 4B gel 通过供价偶联制备，具有较高的标签融合蛋白加载容量，杂蛋白非特异结合少，可用于蛋白质免疫共沉淀和少量蛋白质纯化。 

货号	名称	规格	价格（元）
20586ES03/08	Anti-HA Affinity Gel （Anit-HA亲和纯化凝胶）	1ml/5ml	1487/4797
20586ES25/60		25ml/100ml	20987/76187
20587ES03/08	Anti-Myc Affinity Gel （Anti-Myc标签亲和纯化凝胶）	1ml/5ml	1487/4797
20587ES25/60		25ml/100ml	20987/76187
20588ES03/08	Anti-V5 Affinity Gel （Anti-V5标签亲和纯化凝胶）	1ml/5ml	1487/4797
20588ES25/60		25ml/100ml	20987/76187
20589ES03/08	Anti-His Affinity Gel （Anti-His标签亲和纯化凝胶）	1ml/5ml	1487/4797
20589ES25/60		25ml/100ml	20987/76187

 3. 标签多肽

     蛋白标签是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。Yeasen公司推出的标签多肽可用于与带有相应标签的蛋白竞争性结合anti-标签单抗，以达到纯化标签融合蛋白的目的。

货号	名称	规格	价格（元）
20571ES11/25	3X Flag-tag Peptide （3X Flag-tag重复多肽）	4mg/25mg	2157/9537
20572ES11/25	Flag-tag Peptide （Flag-tag多肽）	4mg/25mg	1237/5587
20573ES08/25	c-Myc Tag Peptide（c-Myc Tag多肽）	5mg/25mg	1237/5587
20574ES08/25	HA Tag Peptide（HA Tag多肽）	5mg/25mg	1237/5587
20575ES08/25	V5 Tag Peptide（V5 Tag多肽）	5mg/25mg	1237/5587
20576ES08/25	6X His Tag Peptide（6X His Tag多肽）	5mg/25mg	2557/11837
20577ES08/25	S-Tag (Pancreatic RNase A derivtive) Peptide（S-Tag 多肽）	5mg/25mg	2557/11837
20578ES08/25	T7 Tag Peptide（T7 Tag多肽）	5mg/25mg	2557/11837
20579ES08/25	VSV-G Tag Peptide（VSV-G Tag多肽）	5mg/25mg	2157/9537
20580ES08/25	X-press Tag Peptide（X-press Tag多肽）	5mg/25mg	2157/9537

 

HB200525