正常的DNA甲基化模式如果被破坏(如基因启动子区域的甲基化程度过高或过低)都会导致细胞的癌变。
ICF综合征,是由DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)基因突变而引起的。患者1号、9号和16号染色体异常,在其着丝粒附近具有大量重复的典型卫星DNA序列,这些重复序列表现为低甲基化。
瑞特综合征是由于X染色体上编码MeCP2转录因子的基因突变导致的。MeCP2突变导致该基因调节DNA甲基化的过程异常,从而致病。
翌圣生物最新推出先建库后转化的甲基化研究方案,与您一起探索DNA甲基化的奥秘!
Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®是针对Illumina®高通量测序平台开发的双链DNA甲基化建库试剂盒。本试剂盒通过连接相应的甲基化接头,经亚硫酸氢盐或酶法转化处理,再经过一步扩增即可构建针对Illumina®平台测序的甲基化文库。
图2.双链甲基化建库原理
选择不同的样本进行机械法片段化(除cfDNA),包括10ng 、100ng、1μg的293T gDNA,50ng FFPE DNA,100ng 水稻 DNA和10ng cfDNA,样本中掺入1% λDNA,采用Hieff® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit(12223ES)进行文库转化和Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina(12214ES)进行双链甲基化建库,性能评估结果如下:
12214文库产量、Mapping(%)、Clean/Raw(%)、Dup%优于竞品1!
图3.不同样本不同投入量的文库浓度
图4.不同样本不同投入量的Clean/Raw(%)
图5.不同样本不同投入量的Map Ratio(%)
图6.不同样本不同投入量的Dup(%)
甲基化双链建库,λ DNA的转化率>99.8%!
图7.双链甲基化建库对样本转化率的评估
产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®双链DNA甲基化建库试剂盒 |
12214ES08 |
8T |
12214ES24 |
24T |
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12214ES96 |
96T |
产品名称 |
产品货号 |
产品应用 |
Hieff® DNA Bisulfite Conversion Kit |
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柱式-亚硫酸氢盐转化 |
Hieff® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit |
磁珠法-亚硫酸氢盐转化 |
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Hieff® DNA Trans-Enzymatic methyl- Conversion Kit |
12213ES |
反向-酶法转化 |
Hieff® DNA Pos-Enzymatic methyl- Conversion Kit |
12212ES |
正向-酶法转化 |
Hieff NGS® Methyl-seq DNA library Prep kit for Illumina® V2 |
甲基化建库 |
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Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase |
甲基化转化后PCR扩增 |