常用的检测方法为使用特异性抗体,通过荧光灶试验(FFA)、空斑试验或细胞培养半数感染量(CCID50)等来实现,但是这些方法均涉及特异性抗体制备困难、操作复杂且要求高、耗时长、主观性大、通量小等不足,不利于多价疫苗产品的精准配制和生产全过程的质量控制。空斑试验被认为是测定病毒感染性的金标准,但它耗时、劳力密集,且需要每种病毒的适宜细胞系和空斑形成。
相比之下,qPCR是一种简单的、高通量的测定纯化病毒样本中病毒颗粒数的方法。基于核酸的定量检测方法具有试剂材料可及性强、可操作性强、一致性高、耗时短、通量大、结果更加客观等优点,已经成功应用于甲型肝炎、腮腺炎病毒疫苗、AAV基因治疗药物等。
如MSD RotaTeq(口服轮状病毒疫苗)使用的就是基于细胞感染的核酸定量检测方法(qPCR法),但由于疫苗毒株不同,基因序列不同,细胞感染特点也不同,该方法需要针对不同疫苗毒株进行不同设计。
AAV(腺相关病毒)基因治疗药物因其“一次给药,终身治愈”的特点,发展势头的强劲自不必多说,因此AAV药物的质量控制(鉴别,纯度,含量与效价)至关重要。由于其生物学滴度的测定仍很繁琐,不同实验室使用各自的方法和参照,这些都会影响rAAV在临床上的应用,因此qPCR法因其优势在AAV检测中应用更为广泛。