Exonuclease I：特异性去除单链DNA，PCR引物去除的最佳选择
核酸外切酶I（Exonuclease I）是一种对变性或单链脱氧核糖核酸具有高度选择性的核酸外切酶，作用时，Exonuclease I从单链聚脱氧核糖核苷酸的3 羟基端开始攻击，随后逐步释放出脱氧核糖核苷5 ' -单磷酸盐，但末端二核苷酸会保持完整，对双链DNA或RNA无活性。常用于在Sanger测序或SNP分析之前去除PCR反应中的单链引物、去除巢式PCR中的单链引物、PCR产物酶法纯化、从核酸混合物中去除含有3'羟基末端的单链DNA等。
图1. Exonuclease I降解单链DNA示意图
翌圣的Exonuclease I（Cat#14535ES）由分子酶改造平台——ZymeEditor™重组表达而来，可高效消化单链DNA，严格质控，无核酸外切酶（双链）、核酸内切酶、RNase残留，80℃处理即可失活，适用于各种PCR反应后引物的去除及从核酸混合物中去除含有3'羟基末端的单链DNA。
20 μL反应体系中加入终浓度为15 pmol/μL的单链DNA底物，分别使用不同投入量（0.63、1.25、2.5、5、10、20 U）的翌圣及进口品牌N*的Exonuclease I在37℃下孵育15 min，80℃热失活15 min，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测单链DNA降解情况。结果显示翌圣的Exonuclease I消化单链DNA的能力与进口品牌N*一致。
图2. 翌圣及进口品牌N*对单链DNA的消化能力
将500 ng底物DNA与100 U的Exonuclease I在37℃下孵育4 h，琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带不发生变化，表明Exonuclease I无核酸内切酶残留。
图3. 核酸内切酶残留检测
将底物RNA与20 U的Exonuclease I在37℃下孵育4 h，琼脂糖凝胶电泳检测RNA条带不发生变化，表明Exonuclease I无RNase残留。
图4. RNase残留检测
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定位 |
产品名称 |
产品货号 |
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PCR产物纯化（核酸外切酶I+碱性磷酸酶）
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Exonuclease I (20 U/μL) |
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Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) |
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高保真PCR预混液 |
2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye) |
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琼脂糖 |
Agarose |
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核酸染料 |
YeaRed Nucleic Acid Gel Stain(10,000× in Water) |
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DNA Marker |
GoldBand系列marker |
10501ES-10518ES |
