核糖核酸(RNA),存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA的碱基主要有4种,即A(腺嘌呤)、G(鸟嘌呤)、C(胞嘧啶)、U(尿嘧啶),其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T(胸腺嘧啶)。核糖核酸在体内的作用主要是引导蛋白质的合成。
图1.DNA和RNA的结构
人体一个细胞含RNA约10pg(含DNA约7pg)。在细胞中,根据结构功能的不同,RNA主要分三类,即tRNA(转运RNA),rRNA(核糖体RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA含量低,占细胞总RNA的1%~5%。核糖体RNA特点含量高,占细胞总RNA的80%~85%。
表1:RNA的结构和功能
随着高通量组学技术的应用,在高等哺乳动物中已发现高达数十万种非编码RNA,根据结构与功能可对其进行科学分类和系统命名,如tRNA、rRNA、snRNA、snoRNA、siRNA、miRNA、piRNA和lncRNA等。非编码RNA是当今生命科学发展最为迅速的前沿领域之一,它不断更新人们对生命本质的认识,为生物遗传育种及人类重大疾病的干预、防治和药物研究等提供全新的思路与技术(Amaral et al,2008)。
图2.非编码RNA的生物学功能(Cell. 2019 Nov 14; 179(5): 1033–1055.)
RNA研究的第一步为RNA提取,高质量的RNA是进行转录组测序、RT-PCR等试验的基础,然而由于RNA单链结构的不稳定性和无处不在的RNA酶,使得RNA在提取过程中容易发生降解,同时,传统的RNA提取方法毒性大,因此,提取出高质量的RNA,选择合适的提取产品非常重要!
对于常规的新鲜或冻存的组织、贴壁细胞、悬浮细胞RNA提取,我们首推MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit 细胞/组织总RNA提取试剂盒19221ES,适用于10-20 mg动物组织或(1-5)×106个动物细胞的总RNA提取纯化。
RNA纯度高:配有基因组DNA吸附柱,可有效去除DNA污染;
安 全:无需有毒的酚、氯仿等有机物抽提;
快速简便:无需异丙醇或乙醇沉淀操,操作过程30 min完成;
使用方便:全流程室温操作,无需冰浴和低温离心。
取106个杂交瘤细胞,分别使用19221和TRIzol(货号:10606ES)提取总RNA。之后测定浓度和琼脂糖凝胶电泳;同时取2 μL,使用Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit(货号:11143ES)进行定量测试小鼠GAPDH。结果显示,MolPure® Cell/Tissue RNA Kit能稳定提取RNA,RNA产量高,完整度较好。
图 2.RNA 质量和浓度
图3.一步法反转录定量结果 (注:绿色为 19221,蓝色为 Trizol)
老师们可能会疑问为什么不首推Trizol或Trizol相关的产品呢?因为TRIzol有它固有的缺点:
有难闻的刺鼻气味
提取过程用到的酚、氯仿都为有毒有机物
提取时间长
如果老师们从成本的角度考虑,我们也有性能优异的Trizol提取产品。
MolPure® TRIeasy Plus Total RNA Kit总 RNA 提取试剂盒(带离心柱)19211ES是利用MolPure® RNA Column A1和改进的异硫氰酸胍/酚一步法(TRIzol法)来提取样品中的总RNA,适用于TRIzol法所能提取的所有样本,包括各种动植物、细菌和细胞样品。该试剂盒方便快捷,1 h完成可完成操作,且不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程。
适用范围广:可通用动物、植物、细菌、细胞等样品
使用方便:“TRIzol+离心柱”形式,易于操作
快速简便:操作过程1 h完成
图 4.RNA 质量和浓度
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasy™ 总RNA提取试剂 10606ES是一种适用于各种动植物、细菌组织、细胞的总RNA抽提试剂,具有极强的裂解能力,并有效抑制样本中RNA的降解,保持RNA的完整性。
TRIeasy™ LS Total RNA Extraction Reagent 液体总RNA提取试剂(同TRIzol LS)19201ES是一种适用于各种动植物、酵母、细菌等液体样本的总RNA抽提试剂,具有极强的裂解能力,并有效抑制样本中RNA的降解,保持RNA的完整性。
MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit细胞/组织miRNA提取试剂盒 19331ES适用于TRIzol法所能提取的所有样本,包括各种动植物、细菌组织和培养细胞中总RNA、miRNA和其他各种小RNA的提取。该试剂盒可选择提取包含miRNA的总RNA,或只针对microRNA富集,不包含>200 nt其它RNA,30min可完成单样本的提取。
产品名称/货号 |
适用样本类型 |
操作简便性 |
操作时间 |
gDNA去除 |
安全性 |
动物组织或培养细胞 |
★★★★★ |
30 min |
是 |
★★★★★ |
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动植物组织、培养细胞 |
★★★★ |
1 h |
否 |
★★★★ |
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TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasy™总RNA提取试剂 (10606ES) |
动植物、细菌组织、细胞 |
★★★ |
1 h |
否 |
★★★ |
TRIeasy™ LS Total RNA Extraction Reagent 液体总RNA提取试剂(同TRIzol LS)(19201ES) |
动植物、酵母、细菌等液体样本 |
★★★ |
1 h |
否 |
★★★ |
动植物、细菌组织和培养细胞miRNA提取 |
★★★★★ |
30 min |
是 |
★★★★★ |