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组织/细胞RNA提取指南,彻底摆脱选择综合征!

核糖核酸(RNA),存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA的碱基主要有4种,即A(腺嘌呤)、G(鸟嘌呤)、C(胞嘧啶)、U(尿嘧啶),其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T(胸腺嘧啶)。核糖核酸在体内的作用主要是引导蛋白质的合成。

 

图1.DNA和RNA的结构

 

 

 
RNA的分类

人体一个细胞含RNA约10pg(含DNA约7pg)。在细胞中,根据结构功能的不同,RNA主要分三类,即tRNA(转运RNA),rRNA(核糖体RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA含量低,占细胞总RNA的1%~5%。核糖体RNA特点含量高,占细胞总RNA的80%~85%。

表1:RNA的结构和功能

 

 

 
特殊RNA

随着高通量组学技术的应用,在高等哺乳动物中已发现高达数十万种非编码RNA,根据结构与功能可对其进行科学分类和系统命名,如tRNA、rRNA、snRNA、snoRNA、siRNA、miRNA、piRNA和lncRNA等。非编码RNA是当今生命科学发展最为迅速的前沿领域之一,它不断更新人们对生命本质的认识,为生物遗传育种及人类重大疾病的干预、防治和药物研究等提供全新的思路与技术(Amaral et al,2008)。

图2.非编码RNA的生物学功能(Cell. 2019 Nov 14; 179(5): 1033–1055.)

 

RNA研究的第一步为RNA提取,高质量的RNA是进行转录组测序、RT-PCR等试验的基础,然而由于RNA单链结构的不稳定性和无处不在的RNA酶,使得RNA在提取过程中容易发生降解,同时,传统的RNA提取方法毒性大,因此,提取出高质量的RNA,选择合适的提取产品非常重要!

 

 
动物组织细胞RNA提取

 

对于常规的新鲜或冻存的组织、贴壁细胞、悬浮细胞RNA提取,我们首推MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit  细胞/组织总RNA提取试剂盒19221ES,适用于10-20 mg动物组织或(1-5)×106个动物细胞的总RNA提取纯化

 

 
产品特点
 
  • RNA纯度高:配有基因组DNA吸附柱,可有效去除DNA污染;

  • 安    全:无需有毒的酚、氯仿等有机物抽提;

  • 快速简便:无需异丙醇或乙醇沉淀操,操作过程30 min完成;

  • 使用方便:全流程室温操作,无需冰浴和低温离心。

 

 
产品性能
 

取106个杂交瘤细胞,分别使用19221和TRIzol(货号:10606ES)提取总RNA。之后测定浓度和琼脂糖凝胶电泳;同时取2 μL,使用Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit(货号:11143ES)进行定量测试小鼠GAPDH。结果显示,MolPure® Cell/Tissue RNA Kit能稳定提取RNA,RNA产量高,完整度较好。

 

图 2.RNA 质量和浓度

图3.一步法反转录定量结果 (注:绿色为 19221,蓝色为 Trizol)

 

 
 
 
 
 
 

 

老师们可能会疑问为什么不首推Trizol或Trizol相关的产品呢?因为TRIzol有它固有的缺点

 

  • 有难闻的刺鼻气味

  • 提取过程用到的酚、氯仿都为有毒有机物

  • 提取时间长

 

如果老师们从成本的角度考虑,我们也有性能优异的Trizol提取产品

 

MolPure® TRIeasy Plus Total RNA Kit总 RNA 提取试剂盒(带离心柱)19211ES是利用MolPure® RNA Column A1和改进的异硫氰酸胍/酚一步法(TRIzol法)来提取样品中的总RNA,适用于TRIzol法所能提取的所有样本,包括各种动植物、细菌和细胞样品。该试剂盒方便快捷,1 h完成可完成操作,且不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程。

 

 
产品特点
 
  • 适用范围广:可通用动物、植物、细菌、细胞等样品

  • 使用方便:“TRIzol+离心柱”形式,易于操作 

  • 快速简便:操作过程1 h完成

 

 
产品性能
 

 

取6×105左右个293T细胞,分别使用19211ES和竞品提取总RNA。之后测定浓度和琼脂糖凝胶电泳;结果显示,MolPure® TRIeasy Plus Total RNA Kit 19211ES能稳定提取RNA,RNA产量高,纯度和完整度较好。

 

图 4.RNA 质量和浓度

TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasy™ 总RNA提取试剂 10606ES是一种适用于各种动植物、细菌组织、细胞的总RNA抽提试剂,具有极强的裂解能力,并有效抑制样本中RNA的降解,保持RNA的完整性。

TRIeasy™ LS Total RNA Extraction Reagent 液体总RNA提取试剂(同TRIzol LS)19201ES是一种适用于各种动植物、酵母、细菌等液体样本的总RNA抽提试剂,具有极强的裂解能力,并有效抑制样本中RNA的降解,保持RNA的完整性。

MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit细胞/组织miRNA提取试剂盒 19331ES适用于TRIzol法所能提取的所有样本,包括各种动植物、细菌组织和培养细胞中总RNA、miRNA和其他各种小RNA的提取。该试剂盒可选择提取包含miRNA的总RNA,或只针对microRNA富集,不包含>200 nt其它RNA,30min可完成单样本的提取。

 

 

 
产品选择指南

 

 

产品名称/货号

适用样本类型

操作简便性

操作时间

gDNA去除

安全性

MolPure® 细胞/组织总RNA提取试剂盒(19221ES)

动物组织或培养细胞

★★★★★

30 min

★★★★★

MolPure® 总RNA提取试剂盒(带离心柱)(19211ES)

动植物组织、培养细胞

★★★★

1 h

★★★★

TRIeasy Total RNA Extraction Reagent TRIeasy总RNA提取试剂 (10606ES)

动植物、细菌组织、细胞

★★★

1 h

★★★

TRIeasy LS Total RNA Extraction Reagent 液体总RNA提取试剂(同TRIzol LS)(19201ES)

动植物、酵母、细菌等液体样本

★★★

1 h

★★★

MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit细胞/组织miRNA提取试剂盒(19331ES)

动植物、细菌组织和培养细胞miRNA提取

★★★★★

30 min

★★★★★

 

 

 

400-6111-883