逆转录酶是逆转录的核心酶原料,被广泛应用于RT-PCR/qPCR、RNA-seq、单细胞测序等场景,但不同应用场景对逆转录酶有不同的性能要求,如RT-qPCR,需要逆转录酶具有高灵敏度、高cDNA产量、可兼容复杂结构模板等;在主流单细胞测序技术中,还需要具有末端转移酶活性;用于cDNA克隆则需要可以合成全长的cDNA。目前市售的逆转录酶很难实现一酶兼具多种应用场景,不同的应用场景往往需要筛选不同的逆转录酶。
为实现一个逆转录酶可兼具多个应用,翌圣ZymeEditor™酶改造平台通过对M-MLV进行定向改造获得了性能全方面提升的全能型逆转录酶:Hifair® Ultra Reverse Transcriptase(Cat#14604ES),可兼具RT-PCR/qPCR、RNA-seq、单细胞测序、cDNA克隆和文库构建等多个应用场景。
超高灵敏度:可对1pg Total RNA有效逆转录
快速逆转录:5 min即可完成cDNA合成
持续合成能力强:无RNase H活性,最大合成长度可达20 kb
高热稳定性:最高反应温度可达65℃,提升复杂结构模板兼容性
TdT活性:可向合成的DNA 3′ 末端非模板特异性地添加核苷酸
RT-qPCR:优异的灵敏度及批次间稳定性
图1. RT-qPCR检测数据,红,蓝,绿分别表示14604ES的3个不同批次
分别投入5、50、500 ng的293T RNA,使用3个批次的14604ES在55℃逆转录5 min,逆转录产物进行qPCR检测,结果显示14604ES的3个批次在各个投入量下,△Ct值均< 0.5,表明14604ES具有优异的灵敏度及批次间稳定性。
RNA-seq:高建库产量,低低宿主DNA 残留
图2. 14604ES应用于RNA-seq建库产量
图3.14604ES应用于 RNA-seq测序质量
应用于RNA建库,14604ES的建库产量高于进口品牌,测序数据质量相当且宿主DNA残留更低。
逆转录酶选择指南
定位 |
产品名称 |
产品货号 |
应用于RT-LAMP |
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase |
11111ES |
应用于RNA-seq |
Hifair® IV Reverse Transcriptase |
11112ES |
应用于RT-PCR/qPCR |
Hifair® V Reverse Transcriptase |
11300ES |
应用通用型:RNA-seq、RT-PCR、单细胞测序等 |
Hifair® Ultra Reverse Transcriptase |
14604ES |
适用于10x Genomics及国产单细胞仪器平台 |
YeaCell™ 1st Strand Synthesis kit for Single Cell 3ʹRNA-seq |
13594ES |
注:翌圣逆转酶系列均可提供高低浓度、无甘油等不同产品形式。