日常实验中,在贴壁细胞传代前需要把细胞用消化试剂从培养容器表面解离出来,细胞得以分离成单个悬液传代至含新鲜培养基的新容器内。细胞消化的好,后续实验就会进行的更加顺利;反之,则既浪费了时间又出不了成果。在细胞消化的方法中,酶消化法是最常用的方法,使用合适的消化酶则是细胞消化的关键步骤,今天小翌就来给大家整理一篇细胞消化类产品选择指南,方便您更好的选择适合自己实验的产品。
胰蛋白酶
重组胰蛋白酶
重组胰蛋白酶是一种使用基因工程技术生产的酶。现代生物制药的生产过程中,使用含有动物源的原料,可能会将引起人畜共患病的潜在病毒源带入产品中,如疯牛病的BSE、口蹄疫病毒等,为了减少污染源,通过基因工程技术合成胰蛋白酶,解决了传统使用的猪或牛胰蛋白酶可能带来病毒污染的风险。重组胰蛋白酶多用重组大肠杆菌或酵母系统重组表达并经过多步层析纯化获得,无糜蛋白酶等杂酶污染。重组胰蛋白酶与天然提取的胰蛋白酶相比具有相同的特性,其氨基酸序列与猪源胰蛋白酶序列同源,能特异性切割多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基。因其无动物源污染性和纯度高,在医药开发、生化研究、蛋白组学等领域中有着广泛的应用。
胶原酶
胶原酶(Collagenase)是一种肽链内切酶,能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列并切割该序列中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽,但胶原酶是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶,能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质,使得本品非常适用于组织消化。目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异,分为四种类型:胶原酶I型,II型,III型和IV型,不同酶在应用上有所偏向:
胶原酶Ⅰ,通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备;
胶原酶II,用于心脏、骨、肌肉、肝、甲状腺和软骨等组织来源细胞的制备;
胶原酶III,常用于乳腺细胞的制备;
胶原酶IV,通常用于胰岛细胞的制备,或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
胶原酶Ⅴ,适用于胰腺小岛细胞和结缔组织细胞的分离。
复合胰蛋白酶
除了以上的胰酶和胶原酶外,还有一些常用的复合型产品。比如Accutase是包含蛋白水解酶和胶原酶活性的一种细胞消化液,是胰酶-EDTA消化液的完美替换产品,用于从常规组织培养器皿和粘附培养器皿中消化细胞。Accutase适用于组织解离和细胞分离,因分离后的细胞能保持完好的表面抗原,且不含任何动物动物或者细菌来源组分,可满足对后续如细胞表面标记、病毒生长分析、流式细胞分析以及生物反应器相关检测等多种实验的要求。
胰酶替代物
除了动物胰脏来源的胰酶外,目前有些功能类似的胰酶替代物,如TrypLE™产品,因其纯度高,细胞伤害小,消化作用温和,且能稳定保存在室温条件,逐渐也成为不同细胞系培养的理想消化酶,产品优势也较为明显。这类的产品使用过程无需使用胰蛋白酶抑制剂来灭活,同时也不含有动物源,对于一些无血清生长的贴壁细胞实验更为友好。
其他消化酶
快速有效且温和的细胞消化酶,对细胞损伤小,且能维持细胞膜完整性;
来源于细菌,无支原体或其他动物病毒污染;
稳定性强,不受温度、pH及血清组分的影响;
可用于多种类型组织和细胞的分离等。
产品 | 胰蛋白酶 | 重组胰蛋白酶 | 胶原酶 | Accutase | 胰酶替代物 | Dispase Ⅱ |
翌圣货号 | 40123ES(无酚红,含EDTA) 40124ES(无酚红,无EDTA) 40126ES(含酚红,无EDTA) 40127ES(含酚红,含EDTA) |
40512ES 20416ES(质谱级) |
40507ES 40508ES 40509ES 40510ES 40511ES |
40506ES | 40134ES(含酚红) 40135ES(无酚红) |
40104ES |
来源 | 脊椎动物胰脏(猪) | 大肠杆菌(40512ES)/ 毕赤酵母(20416ES) |
Clostridium histolyticum | 非脊椎动物 | 无动物来源 | Bacillus polymyxa |
消化细胞类型 | 大部分连续的强贴壁细胞系 | 大部分连续的强贴壁细胞系 | 富含胶原蛋白的加厚培养基、多层细胞 | 原代细胞系、干细胞系和组织 | 需要确保细胞表面蛋白完整性的原代细胞等 | 强贴壁细胞系、上皮和一些肿瘤细胞株 |
溶解液 | 含或不含Ca2+、Mg2+的HBSS溶液 | 含或不含Ca2+、Mg2+的HBSS溶液含或不含Ca2+、Mg2+的HBSS溶液(40512ES); 1 mM HCL(20416ES) |
含Ca2+、Mg2+的HBSS溶液 | DPBS溶液 | DPBS溶液 | Hepe缓冲盐溶液 |
细胞存活 | 正常 | 正常 | 正常 | 较好 | 好 | 较好 |
是否需要冻融 | 是 | 是 | 是 | 是 | 否 | 否 |
产品名称 | 货号 | 规格 |
PerfCel™l Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol red 胰酶-EDTA溶液(0.25%),无酚红 | 40123ES60 | 100 mL |
PerfCell™ Trypsin-no EDTA (0.25%), no phenol red 胰酶-无EDTA溶液(0.25%),无酚红 | 40124ES60 | 100 mL |
PerfCell™ Trypsin (0.25%), phenol red 胰酶溶液(0.25%),含酚红 | 40126ES60 | 100 mL |
PerfCell™ Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol red 胰酶-EDTA溶液(0.25%),含酚红 | 40127ES60 | 100 mL |
Trypsin 1:250(powder) 胰蛋白酶1:250(粉末) | 40101ES25 | 25 g |
PerfCell™ Recombinant Trypsin(powder)重组胰蛋白酶(粉末) | 40512ES10/60 | 10 mg/100 mg |
Recombinant Trypsin(MS-SAFE)重组胰蛋白酶(质谱级) |
20416ES60 |
100ug |
PerfCell Tryzyme™Express 酶 (1X),含酚红 | 40134ES60 | 100 mL |
PerfCell Tryzyme™Express 酶 (1X),无酚红 | 40135ES60 | 100 mL |
ACCUTASE细胞消化液 | 40506ES60 | 100 mL |
Dispase II 分散酶II | 40104ES60/80 | 100 mg/1 g |