翌圣ZymeEditor平台RPA核心酶原料助力恒温扩增技术升级！
重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA）是Piepenburg等人在2006年利用参与细胞DNA合成的蛋白重组和修复开发出的一种新的核酸恒温扩增技术。该技术可以在37~42 ℃条件下实现待测靶标的快速检测。它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检测模式等优点，特别适用于基层和现场即时检测，可广泛应用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域[1]。
RPA技术主要依赖于能结合寡核苷酸引物的T4噬菌体来源的重组酶T4 UvsX、单链结合蛋白gp32和链置换Bsu DNA 聚合酶以及两条特异性的上下游引物实现扩增，具体扩增原理如图1所示：
图1.重组酶聚合酶扩增RPA技术扩增原理图[2]
1.重组酶引物复合体的形成：重组酶T4 UvsX在ATP的参与和定位因子（T4 UvsY）的帮助下与扩增引物结合形成重组酶引物复合体，并在双链DNA中寻找同源序列；
2.重组酶引物复合体定位至同源序列：重组酶引物复合体一旦定位到同源序列，则会插入双链DNA形成D-环结构，启动链置换反应，单链结合蛋白gp32会与解开的DNA链结合防止进一步被置换。
3.链置换扩增启动：重组酶T4 UvsX从重组酶引物复合体中被水解，3'端引物暴露并与Bsu DNA聚合酶结合，DNA开始复制延伸，最终两条母链分离，形成两条新的互补双链DNA。该反应在37-42℃下进行，可在30 min内实现目标序列1012倍的扩增。
图2.RPA技术应用
| 产品名称 | 产品货号 | 产品作用 |
| Bsu DNA polymerase (Large fragment, 5 U/μL) | 11078ES | 结合引物与原始靶核酸序列互补合成新的DNA模板 |
| T4 UvsX Recombinase (2 μg/μL) | 11079ES | 具有配对和链转移活性的重组酶 |
| T4 UvsY protein (2 μg/μL) | 11080ES | 重组酶辅助因子，刺激T4 UvsX的单链DNA依赖性ATP酶活性并降低活性所需的T4 UvsX临界浓度 |
| T4 gene 32 protein (gp 32) T4噬菌体基因32编码蛋白 | 11081ES | 参与DNA复制、修复、重组与解链后的单链DNA结合，防止自杂交 |
| Creatine Kinase (2 μg/μL) 肌酸激酶 | 14502ES | 刺激ATP和肌酸分解为磷酸肌酸和ADP，释放能量 |
| Exonuclease III (100 U/μL) | 14525ES | 具有3’→5’外切酶活性，切断荧光探针中淬灭基团，释放荧光 |
客户采用翌圣Bsu DNA polymerase (Large fragment, 5 U/μL)、T4 UvsX Recombinase (2 μg/μL)、T4 UvsY protein (2 μg/μL)、T4 gene 32 protein (gp 32)、肌酸激酶Creatine Kinase (2 μg/μL) 进行RPA扩增反应，得到正确的目的条带，且条带清晰、明亮，结果表明，PRA技术核心酶原料可实现高效RPA等温扩增。
图3 客户测试翌圣重组酶聚合酶核心酶原料扩增结果图
注：2、4为阳性实验组；1、3为阴性对照组
参考文献
[1] Zhao Y, Chen F, Li Q, Wang L, Fan C. Isothermal Amplification of Nucleic Acids. Chem Rev. 2015 Nov 25;115(22):12491-545. doi: 10.1021/acs.chemrev.5b00428. Epub 2015 Nov 9. PMID: 26551336.
[2] 王亚楠, 陈昌国. 重组酶聚合酶扩增技术研究进展[J]. 解放军医学杂志, 2021, 46(5):8.
