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干货 | 翌圣核酸提取宝典，建议先收藏！

 
 
核酸作为一切分子生物学研究的基础，而且提取的核酸质量高低也是决定下游实验成败的关键因素之一。磁珠法提取和硅胶膜离心柱法提取是最常用的两种提取方法。那么，这两种提取方法各有什么特点？提取流程与原理又是什么呢？核酸提取过程中的常见问题有哪些呢？
 
 
 

硅胶膜离心柱法核酸提取原理

硅胶膜表面的硅醇基团呈弱酸性，其水化后带负电。当溶液中存在一定浓度的阳离子后，形成的阳离子桥能够中和DNA和硅醇基团之间的表面负电荷，从而使DNA牢固地吸附在硅胶膜表面。反之，处于低盐水溶液状态下时，由于硅胶膜的硅醇基团与DNA磷酸基团之间的静电排斥，硅胶膜释放DNA。
 
流程

 
特点
  • 实验流程操作简单；
  • 价格低廉；
  • 提取浓度浓度高，纯度高。

 

磁珠法核酸提取原理

运用纳米技术，对超顺磁性纳米颗粒的表面进行表面修饰制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。核酸结合到磁珠上主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用。在盐离子和外加磁场的作用下，能从样本中分离出核酸，并洗去非特异性吸附的杂质，得到纯化后的核酸。

 

 
流程

 
特点
  • 能够实现自动化、大批量的实验操作；
  • 操作简单，用时短，如新冠病毒核酸提取10分钟内可以完成；
  • 安全无毒，符合环保理念。

 

核酸提取常见的问题及解决方案

问题一： A260 / A280异常是什么原因呢？
 
 

A260 / A280比值应大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。

  • DNA提取中RNA 污染会增高260/280比值；

  • RNA提取中RNA降解会增高260/280比值；

  • 蛋白的污染会降低A260 / A280比值。

 

问题二：A260/A230异常是什么原因呢？
 
 

  • 较纯净的核酸A260/A230的比值一般在1.8-2.2之间；

  • 酚、胍盐、蛋白的污染会降低A260/A230的比值；

  • 当样本核酸浓度太低时，A260/A230结果不准确，会导致比值偏低；

  • 当样本浓度低于50ng/µl，A260/ A280、A260/ A230比值波动非常大，应谨慎对待！

 

问题三：提取的基因组DNA生物活性差，为什么？
 
 

  • 提取的基因组DNA中盐分浓度过高，请严格按照说明书操作；

  • 提取的基因组DNA中含有乙醇。离心的速度和时间应该严格遵循说明书要求进行。

 

问题四、质粒提取时出现细菌基因组的污染是怎么回事呢？
 
 

  • 菌体裂解和中和过程中,剧烈混合造成基因组DNA断裂所致。请温和地进行菌体的裂解和中和；

  • 每一步严格按照说明书的操作时间；

  • 细菌的质量差，中有许多断裂或降解而游离的基因组DNA，请使用生长良好的新鲜细菌。

 

问题五：磁珠法提取时，洗脱液中有磁珠有残留怎么办？
 
 
  • 筛选、选择匹配的磁珠；
  • 调节设备，增强外磁场；
  • 放慢磁介入速度并延长磁吸时间。

 

问题六：洗涤洗脱时磁珠有结块怎么办？
 
 

  • 缩短干燥时间；

  • 增强混匀震荡强度。

 

问题七：增加磁珠量是否可以提高核酸得率？
 
 

NO！通常情况下，磁珠法试剂盒给出的参考磁珠用量都是略微过量的。

  • 过多的磁珠将无法均匀分散于液体中；

  • 过量的磁珠会吸附更多的杂质；

  • 过多的磁珠会吸附蛋白酶、溶菌酶等功能成分，导致整个提取效率降低。

 

问题八：一种磁珠是否适配所有的核酸提取体系？
 
 

NO！于不同磁珠适合的体系和用量是不同的，往往需要调整后才能获得更好的提取效果。

  • 有的磁珠适合偏酸性系列的试剂体系，有的适合偏碱性系列的试剂体系；

  • 有的磁珠磁响应性好但是沉降速度快，更适合磁棒式自动提取仪；

  • 有的磁珠沉降速度慢但是磁响应时间长，更适合移液式自动提取仪。

 

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19231ES MolPure® Cell RNA Kit 培养细胞RNA提取
磁珠法RNA提取 18600ES MolPure® Magnetic Tissue/Cell Total RNA Kit 组织/细胞RNA提取
柱式DNA提取 18700ES MolPure® Cell/Tissue DNA Kit 细胞/组织DNA提取
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磁珠法DNA提取 18371ES MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit  FFPE DNA提取
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