背景介绍
随着转录组学的不断深入,RNA的类型,表达调控以及功能的复杂程度远远超乎我们的想象。去除含量占80%以上的核糖体RNA有助于将测序集中在含量少但信息大的RNA上。目前去除rRNA主要是通过探针和RNase H联合使用的方式,处理后的RNA会混杂很多消化产物,酶和离子,不利于后续RNA文库的构建。为此翌圣生物独立研发了RNA纯化试剂盒——Hieff NGS® RNA Cleaner。该产品是基于SPRI(Solid Phase Reversible Immobilization)原理,不需要增加沉淀步骤,就可以高效去除蛋白、盐离子和其它杂质,获得高纯度浓缩的RNA样本。
除此之外,翌圣生物凭借其严格的生产工艺和质量控制,充分保证了产品的性能和批次间的稳定性。
产品应用
产品适用于纯化去除rRNA后的总RNA样本,体外转录的RNA产物,RNA标记产物以及合成的RNA等。纯化后的RNA适用于RNA文库构建、RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northern Blot和RNAi等实验。
产品特点:
01 操作简便
整个纯化过程无需离心、抽滤和沉淀,只需要简单的6步就可以获得高纯度的RNA样品。
图1. RNA纯化流程
(1)将稀释后的RNA样品与磁珠混合;
(2)通过磁力器进行分离,并吸除上清;
(3)80%乙醇漂洗一次;
(4)再次用80%乙醇漂洗一次;
(5)用无RNase的水进行洗脱;
(6)磁力器分离,并转移上清。
02 回收效率高
Hieff NGS® RNA Cleaner 适用于不同来源的RNA样本,与同类产品相比具有更加出色的回收效率。Agilent 2100 Bioanalyzer分析结果显示,使用Hieff NGS® RNA Cleaner获得的峰值均比同类公司高,而峰值的大小代表了相应分子量RNA的含量。
(1) 细胞样本总RNA纯化
图2.人HepG2-总RNA样品在使用纯化试剂盒纯化前后的RNA电泳结果
L:Ladder;N:竞品公司;Y:Yeasen公司;检测仪器:Agilent 2100 Bioanalyzer
(2) 拟南芥样本总RNA纯化
图3.拟南芥-总RNA样品在使用纯化试剂盒纯化前后的RNA电泳结果
L:Ladder;N:竞品公司;Y:Yeasen公司;检测仪器:Agilent 2100 Bioanalyze
(3) 水稻样本总RNA纯化
图4.水稻总RNA样品在使用纯化试剂盒纯化前后的RNA电泳结果
L:Ladder;N:竞品公司;Y:Yeasen公司;检测仪器:Agilent 2100 Bioanalyzer
03 检测精准
使用Hieff NGS® RNA Cleaner,可以有效去除影响RT-PCR反应的抑制剂,让检测结果更加真实。如下表所示,使用相同质量的RNA样品,进行纯化前后Gapdh和β-actin的荧光定量分析,得到的Ct值纯化后比纯化前小。表明纯化后PCR可以得到更高效的扩增。
RNA样品 |
人 |
小鼠 |
拟南芥 |
|||
检测基因 |
Gapdh |
β-actin |
Gapdh |
β-actin |
PP2A |
TUB2 |
纯化前Ct值 |
12.92 |
12.36 |
18.74 |
18.53 |
24.33 |
22.2 |
纯化后Ct值 |
12.32 |
11.89 |
17.62 |
17.91 |
23.38 |
21.35 |
表1:使用总RNA纯化试剂盒纯化前后,RNA样品qRT-PCR Ct值变化
订购信息
产品 |
货号 |
规格 |
12602ES01 |
1 mL |
|
12602ES08 |
5 mL |
|
12602ES56 |
60 mL |
|
12602ES75 |
450 mL |
HB210802