核酸质控作为分子生物学最基础的实验之一,核酸定量的准确与否直接决定着下游实验的结果。目前市面上用的核酸定量方法主要是紫外光吸收法和Qubit荧光染料法。
紫外光吸收法利用分光光度计测定260nm处的吸光度,对DNA和RNA进行定量。与此同时,还能通过计算OD260/OD280估计核酸的纯度,但检测数值极易受到其他污染物(如游离核苷酸、盐和有机化合物)的影响。
Qubit荧光染料法利用荧光染料特异地与双链DNA、单链DNA、RNA或蛋白质相结合,并在特定波长光源的激发下,发出荧光,并不受样本中可能存在的其他杂质分子影响,荧光强度与样品中的靶分子浓度相对应。
表1.核酸定量主流方法比较
ssDNA定量的理想之选——高性价比的翌圣ssDNA Assay Kit for Qubit®
高灵敏度:检测浓度低至50 pg/μL;
线性关系表现佳:0-200 ng范围内,线性关系良好;
信号稳定:优异的染料加上升级优化的Buffer,可室温下维持稳定的荧光强度,在常见污染,如盐、自由核苷酸、溶剂、去污剂或蛋白质等环境下仍有很强的适用性,定量准确;
稳定性好:4℃、25℃处理6个月,性能无明显变化;
应用范围广:使用操作流程简单,实现寡聚核苷酸、引物、变性DNA、单链环状DNA等的快速定量。
性能展示
A:线性表现
B:重复性好
C:污染物耐受测试
表2. 污染物耐受测试结果
D:稳定性良好
表3. 标准品和待测样本稳定性测试
翌圣qubit定量产品解决方案
产品类别 |
产品名称 |
货号 |
定量范围 |
dsDNA HS |
12640ES |
0.2-100 ng; 10 pg/µL-100 ng/µL |
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12641ES |
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12642ES |
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dsDNA BR |
12643ES |
2-1000 ng; 0.1 ng/µL-1000 ng/µL |
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ssDNA qubit |
12645ES |
1–200ng; 50 pg/μL-200 ng/μL |