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精品推荐 | GSH/GSSG比例荧光检测试剂盒

谷胱甘肽(Glutathione)是一种由3个氨基酸残基(甘氨酸、谷氨酸和半胱氨酸)组成的小肽,保护细胞免受活性氧如自由基和过氧化物引起的细胞损伤,主要以还原性谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)和氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione disulfide, GSSG)两种形式存在。
 
图1.GSH和GSSG之间的转化

 

在谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)催化的反应中,两个GSH分子通过巯基脱氢形成二硫键而产生GSSG。此外,谷胱甘肽还原酶(GR)氧化β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(β-NADPH2)的同时会将GSSG转变为GSH。

GSH(还原型谷胱甘肽)和GSSG(氧化型谷胱甘肽)是细胞内常见的抗氧化物质,参与调节细胞内氧化还原状态和清除自由基等。在正常情况下,细胞内GSH/GSSG比例应保持在约100-150:1左右。当氧化应激程度加重时,GSSG的产生会增加,从而导致GSH/GSSG比例下降,这表明细胞内氧化还原状态失衡。该比例可通过比色法、HPLC等方法进行测定,进而评估细胞内氧化还原状态及相关反应途径的活性。

 
50120 GSH/GSSG比例荧光检测试剂盒(绿色荧光)
 
-高灵敏性!-适用范围广!-操作简单!
该试剂盒采用一种特殊的非荧光和pH依赖性谷胱甘肽探针Thiolite Green,通过与GSH反应发出强烈荧光(Ex/Em=490/520 nm),定量分析样品中的GSH含量;通过GSSG Probe将GSSG还原成GSH后再定量分析GSSG的含量。
50120ES GSH/GSSG比例检测步骤汇总
 
 
50120ESGSH/GSSG比例荧光检测试剂盒(绿色荧光)测定的标准曲线
 
图2.GSH标准曲线
 
图3.Total GSH标准曲线(横坐标为GSSG标准液浓度(0.0781-2.5 µM)换算成相应GSH浓度)
FAQ
 
Q1:可以用试剂盒中Assay buffer代替裂解液裂解细胞吗?
A:不行,因为Assay buffer中不含有去垢剂,因此不适用于裂解细胞,建议使用含0.5% NP-40的PBS (pH4-6)作为裂解液。
 
Q2:裂解液中可以含有DTT吗?
A:不行,因为DTT具有还原性,会影响反应。
 
Q3:所有的标准品和样品检测出来的荧光值一样,有可能是什么造成的?
A:有可能是GSH被氧化。
 
Q4:该试剂盒能用于血清和血浆检测吗?
A:可以,但是对于血清样本,在分析之前需要先对样本进行脱蛋白处理。
 
Q5:两条标准曲线该如何选择?
A:在检测还原性谷胱甘肽(GSH)使用GSH standard curve;在检测Total GSH使用GSSG standard curve,但由于GSSG是在酶促反应后转化为GSH进行检测的,1 mol GSSG=2 mol GSH,所以GSSG standard curve的横坐标Total GSH浓度是GSSG标准品浓度的两倍。
 
Q6:该试剂盒灵敏度?
A:该试剂盒可以检测浓度最低为10 nM的GSH。

 

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产品名称

产品货号

规格

GSH/GSSG Ratio Fluorimetric Detection Assay Kit (Green Fluorescence) GSH/GSSG比例荧光检测试剂盒(绿色荧光)

50120ES

200 T

 

400-6111-883