CAR-T细胞疗法是当前医学研究最前沿和热门的方向之一，该法已在白血病，淋巴瘤和多发性骨髓瘤等癌症的临床实验中获得巨大成功，为癌症治疗打开了新格局，为患者的健康提供新方向。

图1.CAR-T细胞治疗流程示意图（参考文献）

CAR-T细胞生产和制备过程中，需将特定CAR基因转导至T细胞的病毒载体上，因此高质量的慢病毒载体的生产是GMP生产过程中极为重要的环节。为对慢病毒载体进行精准分析和产品质量控制，中国国家药监局药品审评中心(CDE)发布的《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑药典》和《基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则》等相关指导原则指出，建议对慢病毒载体进行滴度检测，其中免疫分析法(ELISA)是行业内检测慢病毒物理滴度的首选方法，病毒载体颗粒数量即p24抗原含量。HIV-1 p24 ELISA检测试剂盒用于检测HIV-1的慢病毒中p24蛋白含量。

HIV-1 Gag蛋白是一种晚期结构蛋白，包括四种蛋白：基质 (p17)、衣壳 (p24)、核衣壳 (p7) 和 p6 蛋白。P24是结构基因Gag的产物，是HIV病毒颗粒的主要结构蛋白，在病毒的包装和成熟过程中起到十分重要作用。P24蛋白的氨基酸序列在HIV中高度保守，若缺失p24会导致病毒无法成功正常组装。

图2.HIV病毒颗粒示意图（图片来自网络）

p24抗原检测可实现慢病毒产品质控要求，通过滴度计算，一个慢病毒颗粒（Lentiviral Particle，LP）约含有2×103个P24蛋白分子，1ng含量的p24为1.25×107LPs（≈1.25×10^4-5TU），即正常情况下，每100-1000LPs中含有1个具有感染活性的病毒载体，即1个TU。

依据标准品实验数据通过四参数拟合方式拟合标准曲线。

图3.HIV-1 p24 ELISA Kit标曲数据与示意图

板内精密度：3个不同加标浓度样本分别在同一板子上检测8次，拟合板内差异，变异系数均值为4.6%，重复性较好；

板间精密度：3个不同加标浓度样本分别在统一批次的3个板上检测20次，拟合板间差异，变异系数均值为6.0%，重复性较好。

表1.HIV-1 p24 ELISA Kit精密度数据

分别在3份以上正常人血清，人血浆和培养基等多样本下，添加梯度浓度的重组人血清白蛋白，拟合计算加标回收率，均在80-120%范围。

表2.HIV-1 p24 ELISA Kit各样本加标回收率数据

分别在3份以上正常人血清，人血浆和培养基等多样本下，添加重组人血清白蛋白做稀释线性，拟合计算稀释线性数据，均在正常范围内。

表3.HIV-1 p24 ELISA Kit各样本稀释线性数据

灵敏度：重复检测20次零孔OD值，计算相应的浓度来确定人血清白蛋白的最低检测剂量为2.7 pg / mL。

试剂盒内各耗材均通过37℃放置加速实验验证，变异系数于7天加速值为95%，拟合标曲稳定正常，确定其加速稳定性效果较好。

图4.HIV-1 p24 ELISA Kit加速稳定性示意图

翌圣生物自研产品HIV-1 p24蛋白检测试剂盒适用于CAR-T质控，相关疾病检测研究和慢病毒转导效率检测等领域的科研蛋白定量，以期助力研究工作对机制研究和潜在临床价值的探索。产品在上市前均严格质检，确保研究检测准确性。

Barrett D M ,  Singh N ,  Porter D L , et al. Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer[J]. Annual Review of Medicine, 2013, 65(1).