翌圣超低残留分子酶解决tNGS/mNGS背景菌干扰
近年来全球感染性疾病的发病率有所上升，病原体呈现多样化和复杂化的发展趋势，半数患者存在病原体不明的困境，病原体的快速诊断面临严峻挑战。目前用于临床病原体检测的方法包括传统培养法、PCR法、宏基因组测序（mNGS）、病原靶向测序（tNGS）等。
表1.病原体检测方法比较
常用的PCR或mNGS、tNGS病原检测方法等都需要用到一系列的分子酶，如用于PCR，tNGS用的Taq DNA Polymerase；用于建库的T4 DNA Polymerase、T4 Polynucleotide Kinase、T4 DNA Ligase等。由于商业化分子酶主要采用工程菌株（如大肠杆菌等）进行重组表达，因此分子酶中会存在一定量的宿主基因组DNA残留。加上制备环境和人源等因素影响，分子酶制品中极易存在污染DNA。在病原体检测过程中，污染的DNA可能会淹没低丰度的靶标核酸或和靶标核酸一起被检出，从而影响结果的判读。
为解决病原检测背景菌干扰问题，翌圣已建立完善的超低残留分子酶研发、生产平台，通过物料、环境、工艺、过程、质量等多环节把控，目前已实现多种超低残留分子酶的规模化生产。
严格地来料检测，筛选低残留高级别的试剂和耗材，避免引入外源核酸污染。
严格按照ISO13485质量管理体系，遵循GMP标准进行分子酶生产。在符合D级、C级和局部A级洁净室标准的环境下，使用全封闭式系统进行分子酶的制备，避免外源核酸污染，保证分子酶的低残留和高性能。
常规分子酶生产工艺需要的纯化步骤多，且产量较低。制备低残留高纯度的分子酶产品时，质量与产量之间难以平衡，且可控性差，合格率低，因而导致批次间差异较大。
翌圣的超低残留去除技术纯化步骤由繁变简，针对性的逐级去除相关残留，在精准高效地去除残留的同时，提高纯化工艺的稳定性与产量，降低批间差。
翌圣同步搭建了分子酶分析与质控平台，遵循ISO13485质量管理体系进行酶活、残留（核酸酶、宿主DNA等）检测、应用表征等方法学的开发、验证、转移、确认、产品质控及放行，确保产品质量。
图4. 分子酶分析与质控平台
翌圣ZymeEditorTM双向分子酶理性设计与定向进化平台开发的高性能分子酶，通过超低残留分子酶生产工艺及UCF.ME®超洁净分子酶生产基地生产制备，目前可规模化提供用于RT-qPCR检测，NGS建库的全套高性能、超低残留分子酶原料，助力解决病原检测中的背景菌干扰，提高检测准确度。
部分残留数据展示（以UCF.ME® Taq DNA聚合酶为例）
1.E.coli基因组DNA残留< 0.005 copies/1 U
对不同批次的Taq DNA 聚合酶进行宿主（E.coli）基因组DNA残留检测，结果显示Taq DNA聚合酶宿主基因组DNA残留远低于0.005 copies/1 U。
图5. Taq DNA聚合酶E.coli 基因组DNA残留检测
对翌圣及进口品牌A的Taq DNA聚合酶进行质粒DNA残留检测，结果显示，进口品牌的Taq DNA聚合酶中存在质粒DNA残留，翌圣超低残留Taq DNA聚合酶中质粒DNA残留无检出，具有批次间稳定性。
图6. 翌圣及进口品牌A Taq DNA聚合酶质粒DNA残留检测
图7. 翌圣不同批次Taq DNA聚合酶质粒DNA残留检测
为更好地解决病原检测中的背景菌干扰问题，翌圣特别推出超低残留分子酶定制化生产服务，可根据客户需求进行酶类、核酸残留水平、规格等多参数定制化生产。如需了解更多信息，可拨打400-6111-883热线或与业务员同事18186211438（微信同号）联系，我们将竭力为您服务！
