Benzonase Nuclease高活力全能核酸酶
——纯度>90%，酶活>250U/μL，无内毒素，无标签
1. 产品简介
全能核酸酶，又称广谱核酸酶，英文名称Benzonase Nuclease，一种来源于Serratia Marcescen的基因工程酶。它可以降解所有形式的DNA和RNA，包括单链、双链、线状、环状、天然以及变性的核酸，将它们消化成3-8个碱基长度的5-单磷酸寡核苷酸，且不具有碱基识别特异性。另外，全能核酸酶在非常广泛的条件下（6M urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）都能保持很高的稳定性和消化活力，非常适用于作为各类科学研究以及疫苗、蛋白、多糖类制药工业的首选酶制剂，去除样本或制品中的核酸残留，提升样本纯度和制品生物功效。
图1 全能核酸酶结构图
2. 产品应用
1）用于除去生物制品中的DNA/RNA
美国FDA对治疗用每剂量的生物制品的核酸含量要求为低于10 pg，国内对此相应的要求为低于100 pg。全能核酸酶可用于疫苗、多糖、蛋白等工业生物制品中核酸的去除，使生物制品的最终核酸含量符合要求，同时提高生物制品功效。
2）用于降低细胞破碎后的粘度
全能核酸酶可以降解所有形式的核酸，降低细胞裂解液的粘度，提高蛋白得率，改善分离效果，使之易于过滤（尤其是超滤），利于下游层析纯化操作。
图2 细胞裂解液Benonase处理（A）和未处理（B）比较图
3）用于细胞培养来源产物的纯化过程
核酸很容易粘附在病毒样颗粒（VLP）、病毒粒子、包涵体等细胞生成颗粒的表面，使颗粒大小或电荷发生改变，造成这些颗粒的聚集，如外周血单细胞（PBMC）存放过程中的结块现象。全能核酸酶可有效降解核酸，避免核酸对细胞产物的影响以及纯化效率，利于提高细胞产物纯化效率。
4）用于生化分析样品的制备
在ELISA、色谱分析、双相电泳和足迹分析等过程中，用全能核酸酶处理含有核酸的蛋白样品，可提高分辨率，并提高回收率。
图3 小鼠脑核蛋白Benonase处理（A）和未处理（B）双向电泳比较图
3. 产品性质
表1 产品性质表
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英文别名（English Synonym） |
BenzNuclease; Universal Nuclease; Benzonase endonuclease |
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CAS号（CAS NO.） |
9025-65-4 |
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分子量（Molecular Weight） |
27.9 kDa |
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来源（Source） |
真核酵母表达 |
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标签（Tag） |
无标签 |
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纯度（Purity） |
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酶活（Enzyme Activity） |
≥250 U/μL |
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比活（Specific Activity） |
≥1.0×106 U/mg蛋白 |
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蛋白酶（Protease） |
Undetected |
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内毒素（Endotoxin） |
Undetected（鲎试剂法） |
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最适pH（Optimum pH） |
8.0（工作范围pH 6-10） |
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最适温度（Optimum Temperature） |
37℃（工作范围0-42℃） |
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辅助因子（Cofactor） |
1-10 mM Mg2+ |
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储存缓冲液（Storage Buffer） |
20 mM Tris-Cl pH8.0，2 mM MgCl2，2 mM NaCl，50%甘油 |
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稀释缓冲液（Dilution Buffer） |
20 mM Tris-Cl pH8.0，2 mM MgCl2，2 mM NaCl |
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活性单位定义（Unit Definition） |
在37℃，pH 8.0反应条件，2.625 mL反应体系中，在30 min内使△A260吸收值变化1.0（相当于完全消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）。 |
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4. 产品使用
1）产品作用条件
全能核酸酶在非常广泛的条件下，都能保持很高的稳定性和消化活力。表1中列举了全能核酸酶可发挥核酸消化作用的部分条件参数。除此之外，全能核酸酶还可耐受6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF，0.4% Sodium deoxycholate。
表2 全能核酸酶作用条件
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条件参数 |
最适条件 |
可作用条件 |
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Mg2+ |
1-2 mM |
1-10 mM |
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pH |
8.0-9.2 |
6.0-10.0 |
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Temp |
37℃ |
0-42℃ |
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DTT |
0-100 mM |
>100 mM |
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β-Mercaptoethanol |
0-100 mM |
>100 mM |
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Monovalent cation（Na+，K+） |
0-20 mM |
0-150 mM |
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PO43- |
0-10 mM |
0-100 mM |
注：1）最适条件为全能核酸酶释放≥90%活力的条件，可作用条件为全能核酸酶释放≥15%活力的条件；2）全能核酸酶活力定义为在37℃，pH 8.0反应条件，2.625 mL反应体系中，在30 min内使△A260吸收值变化1.0（相当于完全消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）。
2）产品酶活测定
一个酶活性单位（U）定义为：在37°C、pH 8.0的反应条件下，30分钟内可将37 µg的底物DNA（鲑鱼精DNA）消化成为寡核苷酸（相当于使260 nm吸收值变化1.0）的Binuclease核酸酶的量。
根据测试，本产品酶活≥250 U/μL，比活≥1.0×106 U/mg蛋白。
3）产品运输、储存及稳定性
固体酶可室温运输，建议储存温度低于4°C。液体酶宜冷藏运输，建议－20°C保存。
液体酶在-20°C条件下，有效期为1年。打开包装使用后，如果在2-8°C环境下放置超过一周时间，建议过滤除菌，防止微生物污染。固体酶储存有效期为3年，打开包装后及时使用，避免受潮。
5. 价格对比
Yeasen致力于为您提供性价比高的产品。
图4 Yeasen全能核酸酶价格优势（25 KU规格）
6. 文献引用
[1] Berg M G, Yamaguchi J, Alessandri-Gradt E, et al. A pan-HIV strategy for complete genome sequencing[J]. Journal of clinical microbiology, 2016, 54(4): 868-882.
[2] Jankowska U, Latosinska A, Skupien-Rabian B, et al. Optimized procedure of extraction, purification and proteomic analysis of nuclear proteins from mouse brain[J]. Journal of neuroscience methods, 2016, 261: 1-9.
[3] Kulkarni P S, Sahai A, Gunale B, et al. Development of a new purified vero cell rabies vaccine (Rabivax-S) at the serum institute of India Pvt Ltd[J]. Expert Review of Vaccines, 2017, 16(4): 303-311.
[4] Rai T S, Adams P D. Chapter Fourteen-ChIP-Sequencing to Map the Epigenome of Senescent Cells Using Benzonase Endonuclease[J]. Methods in enzymology, 2016, 574: 355-364.
[5] Yang Z, Li M, Chen W, et al. The smart solution for DNA removal in biopharmaceutical production by benzonase endonuclease[J]. Journal of Applied Virology, 2013, 2(1).
7. 常见问答
Q. 产品应如何稀释？
A：正常建议稀释比例(终浓度)为1:1000-1:20000，其中时间、温度、稀释比例为影响反应的正面因素。
Q. 产品能否可以减少用量？
A：如希望减少用量，可酌情提高反应温度或延长时间。
Q. 使用该产品进行消化反应的抑制因子有哪些？
A：在含有以下物质的体系中，全能核酸酶的活性会降低50%或以上：>150 mM一价阳离子，>100 mM磷酸盐，>100 mM硫酸铵，>100 mM盐酸胍，>0.1% SDS，>1% Triton X-100，>1% Tween 20。
Q. 怎样灭活全能核酸酶？如何去除？
A：采用EDTA螯合金属离子会可逆地抑制全能核酸酶活性，极端条件会造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃处理30 min等。全能核酸酶可采用阴离子交换柱或气相色谱法从目的产物中分离出去。
Q. 全能核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物是否兼容？
A：全能核酸酶与不含EDTA的蛋白酶抑制剂混合物兼容。若含有EDTA且浓度>1 mM时，会抑制核酸酶活性，建议：如果必须加EDTA，按照2倍EDTA浓度补加Mg2+。
Q. 产品的用量是多少？
A：需要根据重悬菌体所需裂解液的体积来确定需要酶的量。若普通蛋白纯化，则需要浓度为25 U/mL；核蛋白则需要100 U/mL；病毒表达蛋白纯化需要浓度为12.5 U/mL；疫苗产品需要量为0.9-1.1 U/mL。
Q. 产品的稳定性如何，如果不小心在室温放置几天后，酶活性会受到怎样的影响？
A：室温2-3天，对活力影响不大。
Q. 全能核酸酶能在尿素环境消化核酸吗？
A：全能核酸酶在尿素浓度为6 M时活性先增加，随着时间延长活性又有降低；在尿素为7 M时，全能核酸酶15分钟后出现变性并失活。但是在酶失活前多数核酸已经降解了。可通过提高全能核酸酶使用浓度补偿7 M尿素的影响。
8. 订购信息
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产品 |
货号 |
规格 |
价格（元） |
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20125ES25 |
25 KU |
1125.00 |
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20125ES50 |
50 KU |
1965.00 |
|
|
20125ES60 |
100 KU |
3245.00 |
|
|
20156ES25 |
25 KU |
418.00 |
|
|
20156ES50 |
50 KU |
768.00 |
|
|
20156ES60 |
100 KU |
1398.00 |
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产品 |
货号 |
规格 |
价格（元） |
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20101ES60 |
100 mL |
228.00 |
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20115ES60 |
100 mL |
228.00 |
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20114ES60 |
100 mL |
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10405ES03 |
1 mL |
80.00 |
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10406ES03 |
1 mL |
680.00 |
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10607ES15 |
15 KU |
426.00 |
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|
10607ES81 |
10*15 KU |
3126.00 |
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10608ES25 |
25 mg |
336.00 |
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10608ES60 |
100 mg |
686.00 |
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10608ES80 |
1 g |
2866.00 |
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10407ES60 |
100 mg |
386.00 |
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10407ES80 |
1 g |
1646.00 |
