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翌圣TdT末端转移酶助力DNA甲基化测序！

甲基化是研究非常深入的表观修饰之一，大量实验表明甲基化水平与肿瘤发生发展、生长发育、衰老等都有非常密切的关系，是近年来的研究热点之一。DNA甲基化测序是研究中的一个重要的工具手段，TdT末端转移酶(Terminal deoxynucleotidyl transferase)作为DNA甲基化测序的关键酶之一，发挥了至关重要的作用，接下来小翌将围绕它的作用方式、应用场景等方面进行介绍。
图1.DNA甲基化与肿瘤发生的联系[1]
 

 

TdT末端转移酶是非模板依赖的DNA聚合酶，单链和双链DNA分子均可作为TdT末端转移酶的底物，在辅因子Co2+的作用下，能够催化dNTP结合到DNA分子的3′羟基端。TdT末端转移酶可以被应用到TUNEL检测、甲基化文库构建、cDNA文库构建、酶促法合成DNA等技术中。
图2. TdT末端转移酶作用方式[2]
 
 

DNA甲基化测序文库构建

随着DNA甲基化研究的深入，其检测方法也多种多样，包括甲基化荧光PCR法（MethyLight）、全基因组亚硫酸氢盐测序(WGBS)、高效液相色谱法（HPLC）等等。随着技术的更新迭代，一种TdT辅助连接甲基化建库的方法被研究出来，其构建流程如下：
图3. DNA甲基化建库流程

 

  • 重亚硫酸盐（Bisulfite）处理DNA，使未甲基化修饰的胞嘧啶C转化为尿嘧啶U，变性为ssDNA。 
  • 3′接头连接，TdT末端转移酶参与目的DNA 3′端添加接头的过程，催化ssDNA的3′羟基端加上同聚物尾巴（示意图中橙色曲线部分），从而在连接酶的作用下与接头进行连接。
  • DNA二链合成，5′接头连接。
  • PCR扩增获取含有完整接头序列的上机文库。
 
 

TUNEL检测细胞凋亡

TdT末端转移酶也可参与凋亡细胞的检测中。DNA断裂是细胞凋亡的重要特征，晚期可以形成180-200bp的DNA断裂碎片。染色体DNA双链断裂或单链断裂会产生大量的黏性末端，在TdT末端转移酶的作用下，荧光素/酶标记的dUTP结合到DNA的3′端，通过荧光检测完成对细胞凋亡的检测。
图4. TdT标记细胞凋亡[3]
 

 

通过上述应用介绍可以了解到TdT末端转移酶在DNA甲基化文库构建和细胞凋亡检测中都起着非常关键的作用。现在翌圣重磅推出具有低残留、高纯度的特点的TdT末端转移酶，高效进行DNA末端的同聚物加尾。同时搭配其他性能优异的酶产品，助力肿瘤精准医学诊断中甲基化测序相关产品的快速研发。
 
 

性能展示

无切口酶残留

图5. 切口酶残留结果：跑胶结果显示两批次TdT末端转移酶与阴性对照（C）一致，显示无切口酶残留。

 

无核酸外切酶残留

图6. 核酸外切酶残留结果：跑胶结果显示两批次TdT末端转移酶与阴性对照（C）一致，显示无核酸外切酶酶残留。
 
 

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高效率TdT末端转移酶（带buffer）

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase TdT末端转移酶

10302ES

低浓度高效率TdT末端转移酶（不含buffer）

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (20U/μL, without buffer) TdT 末端转移酶

14456ES

高浓度高效率TdT末端转移酶（不含buffer）

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (100 U/µL) TdT末端转移酶

14453ES

高效率连接酶

E. coliDNA ligase (60 U/μL)

14955ES

DNA纯化/分选磁珠

Hieff NGS®DNA Selection Beads

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文库定量试剂盒

dsDNA HS Assay Kit

12640ES

甲基化建库试剂盒

Hieff NGS® Methyl-seq DNA library Prep kit for Illumina 甲基化DNA建库试剂盒

12211ES

细胞凋亡检测试剂盒

TUNEL Apoptosis Detection Kit(FITC) TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)

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