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翌圣逆转录酶助力高质量cDNA合成

当检测靶标为RNA时，需要使用逆转录酶将RNA逆转录为cDNA，再通过Taq酶进行PCR扩增，逆转录酶的表现，直接影响分子诊断试剂的最终性能。针对分子诊断试剂厂家使用痛点，翌圣生物对逆转录酶进行了定向改造，去除了RNase H活性，提高了逆转录酶的热稳定性，兼容复杂结构模板，性能优越，备受客户好评！

 

耐受65℃高温

以500ng 293T细胞的总RNA为模板,使用第三代耐热逆转录酶在42℃-65℃下进行逆转录，取1μL cDNA为模板，扩增TFRC基因(4.4kb)。
图1.在42℃-65℃下进行逆转录
 

兼容复杂模板

反应温度55℃可满足常规模板及二级结构模板的转录，高GC模板可适当提高到65℃反应。
图2.适合二级结构模板、高GC模板
 

延伸性能优越

以500ng 293T细胞的总RNA为模板，oligodT为引物，使用第三代耐热逆转录酶合成cDNA。取1 μL cDNA为模板，扩增DY1C1N1基因(19.9kb)的5’的500bp。结果显示，Hifair®  III Reverse Transcriptase可合成长达19.8kb的cDNA。
图3.最长可合成19.8kb的cDNA

 

合成速度快

以293T细胞的RNA为模板，按说明书标准程序进行逆转录，逆转录时间按5、10、15、30、45、60min分别进行设置。Hifair® III Reverse Transcriptase 5min内可合成6kb的cDNA，特异性和产量均优于V品牌。

图4.5min内可合成6kb的cDNA

 

线性范围广

以5pg-5μg的293T细胞的总RNA为模板，使用第三代耐热逆转录酶合成cDNA。取1μL cDNA为模板，对4个基因进行qPCR检测，结果显示扩增效率均在98%-100.10%之间。说明在宽广的模板线性范围内均可高效合成cDNA。
图5.在很宽的模板范围内均可高效合成cDNA
 

质量控制严

为了保证翌圣的逆转酶的性能稳定，翌圣在生产过程中严格执行要求，以稳定生产工艺，保证批次稳定性。同时加强质检，对包括核酸外切酶、切口酶、RNase等残留进行检测，确保无残留，从而不影响下游的实验。
图6.残留检测

 

翌圣逆转录酶表现出优异的性能，充分满足了客户对更高性能的需求，除此之外，翌圣还提供无甘油可冻干逆转录酶，搭配翌圣其它无甘油产品，可快速调试出可冻干试剂，满足客户冻干需求，让客户的试剂更有竞争力。
 

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