翌圣琼脂糖——直击电泳痛点，跑出一手好胶
直击电泳痛点，跑出一手好胶
琼脂糖（Agarose）是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体，提取自琼脂或者含琼脂的海藻，结构上是一种线性聚合物，由β-D-吡喃半乳糖（1-4）连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基构成。作为一种凝胶试剂，常用于通过凝胶电泳或者印迹法（如Northern或Southern）来进行日常核酸分析，也适用于蛋白应用，如辐射状免疫扩散（RID）实验。
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法，包括制胶、点样、电泳，分析原理与其他支持物电泳最主要区别是它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。将凝胶置于电场中，带电荷的核酸通过凝胶网孔向正极迁移。在不同条件下电泳适当时间后，大小、构象不同的核酸片段将处在凝胶不同位置上，从而达到分离的目的。
图1.核酸电泳实验操作步骤
图2.电泳迁移方向图
如何选购合适的琼脂糖？
1、根据琼脂糖的基本参数进行判断
1）硫酸盐含量（sulfate content）——纯度指标；
2）凝胶强度（gel strength）——施加于凝胶使之断裂的外力；
3）胶凝点（Gel point）——水溶性琼脂糖溶液冷却后形成凝胶时的温度；
4）电内渗（EEO）——液体穿透凝胶的一种电动运动。琼脂糖凝胶内的阴离子基团吸附在基质上不会发生迁移，但是解离的阳离子就会朝负极迁移，从而产生电渗。由于样本的电泳迁移通常是朝正极移动，因此EEO产生的内部对流会干扰分离效率。
根据琼脂糖的基本参数，优质的琼脂糖凝胶应该胶孔清晰、胶体不易断，具备纯度高（硫酸盐含量低）、凝胶强度大、胶凝点相对高（常温条件下凝固快）、电内渗低等特点。
2、根据琼脂糖的分离范围进行判断
琼脂糖凝胶的分离范围较广，常用于DNA切胶回收、DNA分离和用于佐证DNA是否重组、质粒等是否切开。不同大小的目的片段也对应着不同大小的琼脂糖浓度，根据高浓度适合分离小片段原则，可参考下表找到合适自己的最佳胶浓度。
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琼脂糖浓度 % |
≥3 |
2-3 |
1-2 |
0.7-1 |
≤0.7 |
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分子大小 bp |
≤200 |
200-700 |
700-1500 |
1500-5000 |
≥5000 |
翌圣高质量琼脂糖
覆盖多种应用场景，满足您的需求
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
应用场景 |
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Agarose琼脂糖 |
100 g/500 g |
常规核酸电泳 |
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Low Melting Point Agarose 低熔点琼脂糖 |
25 g/100 g |
适用于大于1 kb核酸分离、细胞培养和病毒空斑实验等 |
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3:1 Agarose 3:1琼脂糖 |
25 g/100 g |
小片段DNA（1 kb以下）具有很高的分辨率，可配高达5%的凝胶 |
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High Sieving Agarose 高分辨率琼脂糖(PCR级) |
5 g/25 g |
适宜分离20 bp-800 bp的DNA片段，效果与聚丙烯酰胺相当 |
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Agarose Tablets 琼脂糖(片剂,0.5 g/片) |
1盒（200片） |
应用常规琼脂糖，无需称量更方便 |
产品优势
电渗值低（EEO≤0.13)，条带分离效果好，分得开；跑得快
图2.不同浓度凝胶电泳图
注：0.75%琼脂糖凝胶上样：1kb ladder，1%琼脂糖凝胶上样：100 bp ladder、1kb ladder、2000 DNA Marker、5000 DNA Marker，2%琼脂糖凝胶上样：100 bp ladder、2000 DNA Marker、5000 DNA Marker；上样量：Marker 原液 2 μl 稀释 5 倍后上样 10 μl；0.75%、1%、2％琼脂糖凝胶电泳程序分别为： 115V，45min； 130V，40 min； 130V，50 min。
胶孔清晰直挺，凝胶强度大，不易断裂
注.图示为翌圣琼脂糖10208ES60产品展示图。
高质量琼脂糖使用方法
琼脂糖凝胶浓度通常在0.7%至2%之间选择。浓度越高，凝胶的分子孔径越小，DNA迁移速率越慢，分辨率越高。反之，浓度越低，DNA迁移速率越快，分辨率较低。针对实验目的不同，选择合适的凝胶浓度与适配的电泳缓冲液。
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琼脂糖浓度 |
有效分离范围（bp） |
推荐缓冲液 |
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0.5% |
2,000-50,000 |
1×TAE |
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0.8% |
800-10,000 |
1×TAE |
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1.0% |
400-8,000 |
1×TAE |
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1.2% |
300-7,000 |
1×TAE |
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1.5% |
200-3,000 |
1×TAE/0.5×TBE |
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2.0% |
100-2,000 |
1×TAE/0.5×TBE |
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3.0% |
25-1,000 |
0.5×TBE |
TAE缓冲液：TAE缓冲液含有乙酸（Acetic acid）、EDTA和Tris，适合用于快速电泳和大片段DNA的分离。乙酸的存在降低了凝胶的pH值，有助于提高电泳速度。
TBE缓冲液：TBE缓冲液含有硼酸（Boric acid）、EDTA和Tris，其离子强度较高，适合用于小片段DNA的高分辨率分离。硼酸根离子的存在增强了凝胶的稳定性，有助于提高分离效率。因此凝胶浓度大时，需采用TEB缓冲液，便于分离条带。
琼脂糖片剂（10226ES）使用方法
按0.5g/片剂将适量琼脂糖片剂（10226ES）在缓冲液中浸泡2-3 min使之完全崩解，之后按照常规琼脂糖配制方法操作即可。请参考下表：
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凝胶浓度% |
1片（0.5g/片剂） |
2片（0.5g/片剂） |
3片（0.5g/片剂） |
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1% |
50 mL |
100 mL |
150 mL |
|
2% |
25 mL |
50 mL |
75 mL |
已发表文献（部分）
[1]Li Z, Wang M, Fang H, et al. Solid-liquid interface adsorption of antibiotic resistance plasmids induced by nanoplastics aggravates gene pollution in aquatic ecosystems. Environ Pollut. 2023. doi:10.1016/j.envpol.2022.120456. IF=10.366(10208ES)
[2]Wang M, Zhang S, Zheng G, et al. Gain-of-Function Mutation of Card14 Leads to Spontaneous Psoriasis-like Skin Inflammation through Enhanced Keratinocyte Response to IL-17A. Immunity. 2018;49(1):66-79.e5. doi:10.1016/j.immuni.2018.05.012. IF=19.734
[3]Zhang Y, Ding H, Wang X, et al. MK2 promotes Tfcp2l1 degradation via β-TrCP ubiquitin ligase to regulate mouse embryonic stem cell self-renewal. Cell Rep. 2021;37(5):109949. doi:10.1016/j.celrep.2021.109949. IF=9.423
[4]Zhu Z, Zhang L, Sheng R, Chen J. Microfluidic-Based Cationic Cholesterol Lipid siRNA Delivery Nanosystem: Highly Efficient In Vitro Gene Silencing and the Intracellular Behavior. Int J Mol Sci. 2022;23(7):3999. Published 2022 Apr 3. doi:10.3390/ijms23073999. IF=5.924
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相关产品选择指南
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产品定位 |
产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
应用场景 |
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核酸染料 |
Goldview Nucleic Acid Gel Stain (10,000×) |
1 mL |
特别适合大于1kb的片段检测 |
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YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) |
500 μL |
水溶，与EB具有相同的光谱特性，300 nm处紫外光激发检测 |
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YeaRed Nucleic Acid Gel Stain(10,000× in DMSO) |
500 μL |
DMSO溶液，300 nm处紫外光激发检测 |
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YeaGreen Nucleic Acid Gel Stain (10,000×in Water) |
500 μL |
适用于使用471 nm激发的紫外凝胶成像透射仪或可见光凝胶透射仪 |
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琼脂糖电泳 DNA Marker |
GoldBand DL2000 DNA Marker |
100 T/10×100 T |
100-2000 bp |
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GoldBand DL600 DNA Marker |
100 T/10×100 T |
100-600 bp |
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GoldBand DL5000 DNA Marker |
100 T/10×100 T |
100-5000 bp |
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GoldBand DL10,000 DNA Marker |
100 T/10×100 T |
100-10,000 bp |
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GoldBand 100bp DNA Ladder |
100 T/10×100 T |
100-1,500 bp |
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|
GoldBand 1 kb DNA Ladder |
100 T/10×100 T |
250-12,000 bp |
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GoldBand Full-Scale DNA Ladder |
1 mL |
100-12,000 bp |
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|
GoldBand DL15000 DNA Marker |
100 T/10×100 T |
250-15,000 bp |
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|
GoldBand 50 bp DNA Ladder |
100 T/10×100 T |
50-1000 bp |
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|
GoldBand 100 bp plus DNA Ladder |
100 T/10×100 T |
100-3000 bp |
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|
GoldBand 200 bp DNA Ladder |
100 T/10×100 T |
200-5000 bp |
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|
GoldBand 500 bp DNA Ladder |
100 T/10×100 T |
500-5000 bp |
