为提高含高GC含量或连续多个A/T的复杂基因的PCR扩增效率及扩增特异性,科研人员通常会尝试在PCR反应体系中添加增效剂。翌圣生物现为广大科研人员提供质量高、适用性广的两种PCR增效剂:甜菜碱与海藻糖。
甜菜碱
甜菜碱是一种从甜菜中发现的生物碱,是胆碱氧化代谢的终产物,参与甲硫氨酸(蛋氨酸)生物合成路径,是非常重要的渗透调节物质。翌圣生物提供的甜菜碱有两类,盐酸甜菜碱和甜菜碱水合物,后者分子式为C5H11NO2 H2O,是分子生物学级别,纯度(TLC)≥99%,可用于分子生物学实验。
产品介绍
翌圣生物是在工具酶及其反应辅助试剂方面极具经验,确保原装进口高品质甜菜碱,并大量现货,可保证批次间产品的稳定性。该产品可作为原料用于PCR、RT-PCR、qPCR等实验反应优化的添加剂成分,大大改善扩增效率和扩增特异性、改善逆转录效率等。
甜菜碱特点
1. 甜菜碱可帮助DNA聚合酶顺利通过DNA某些复杂二级结构,防止DNA聚合酶的从模板DNA中解离。DNA局部区域因含有多个复杂碱基(Py-G-C),会促使DNA聚合酶的停滞,最终导致DNA聚合酶停止有效延伸。而甜菜碱可提高DNA小沟中富含鸟嘌呤和胞嘧啶区域的鸟嘌呤和胞嘧啶的水合作用,影响DNA分子结构,改变DNA灵活性,帮助DNA聚合酶沿着DNA模板延伸[1]。
2. 甜菜碱可消除变性温度对碱基的依赖性。浓度依赖性降低高GC含量序列的Tm,并使PCR两引物的Tm相接近,最终降低DNA Tm值[2]。
3. 高浓度的甜菜碱溶液可稳定DNA-蛋白复合物。
4. 在逆转录温度条件下,甜菜碱可减少RNA二级结构的形成。在甜菜碱和海藻糖联合用于逆转录实验时,甜菜碱减少RNA分子内复杂二级结构的形成,降低RNA溶解温度;海藻糖稳定逆转录酶,保持逆转录酶活性。通过二者联合,确保更长cDNA的合成长度[3]。
主要应用
1. 可应用于DNA的测序反应实验中,提升含有重复序列(连续多个A或T)的测序精准性。
2. 提升长片段DNA的PCR成功率。
3. 适用于复杂模板的PCR扩增,如高GC含量DNA的PCR扩增。
4. 适用于某些粗糙模板的直接测序,如经NaOH溶液裂解的细胞裂解物。
5. 适用于较长cDNA的逆转录反应。
6. 作为LAMP环介导等温扩增的添加剂。
甜菜碱参数
中文别名(Chinese Synonym) |
甜菜碱一水合物,一水甜菜碱,三甲基甘氨酸一水合物 |
英文别名(English Synonym) |
Betaine monohydrate;(Carboxymethyl) trimethylammonium hydroxide monohydrate |
CAS号(CAS NO.) |
590-47-6 |
分子式(Formula) |
C5H11NO2 H2O |
分子量(Molecular Weight) |
135.16g/mol |
外观(Appearance) |
晶体粉末 |
纯度(Purity) |
≥99% |
溶解性(Solubility) |
溶于水,可配置成10%水溶液 |
结构式(Structure) |
|
溶液配制
溶于水。浓度为10%水溶液,质量体积比。溶液无色透明。
参考文献
[1]. Mytelka DS,Chamberlin MJ. Analysis and suppression of DNA polymerase pauses associated with a trinucleotide consensus. Nucleic Acids Res.1996 Jul 15;24(14):2774-81.
[2]. Rees WA,Yager TD,Korte J,von Hippel PH. Betaine can eliminate the base pair composition dependence of DNA melting. Biochemistry.1993 Jan 12;32(1):137-44.
[3]. Spiess AN,Ivell R. A highly efficient method for long-chain cDNA synthesis using trehalose and betaine. Anal Biochem.2002 Feb 15;301(2):168-74.
相关链接
海藻糖在分子生物学实验中的应用可参看:分子级别海藻糖(Trehalose)的特点及在分子实验中的应用——高效的酶稳定剂
订购信息
产品货号 |
产品名称 |
规格 |
价格(元) |
60391ES60 |
100g |
286.00 |
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60391ES76 |
500g |
956.00 |