萤火虫萤光素酶（Firefly luciferase）是一种分子量约为61 kDa的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，能够催化萤光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中会发出波长为560 nm左右的生物荧光，该萤光可通过化学发光仪进行测定。检测原理如图所示：

图1：萤火虫萤光素酶检测原理图

Luciferase Reporter Gene Assay kit是一闪光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒，具有灵敏度高的特点，可以高灵敏的检测萤光素酶在哺乳动物细胞中的表达。

裂解能力更强：能够彻底裂解绝大部分种类细胞。

信号更强：能够精准检测弱启动子的表达。

灵敏度更高：可检测低至数百个细胞样本。

线性范围更广：线性检测范围超过酶浓度的8个数量级。

干冰运输。-20℃保存，有效期1年。

试剂盒内萤火虫萤光素酶检测试剂不能反复冻融，建议分装-20℃或-80℃保存。

Q：该试剂盒中裂解后一定要离心吗？

A：可以选做。

Q：测定时间为 10 s，测定间隔为 2 s，为什么这样推荐？如果这样设置，96 孔板这样设置，会导致每孔时间相差很大。仪器可以同时出数据。工程师建议设置动力学检测， 设置总时间。

A：不同仪器，设置时间可以不一样。单管手动检测，就按说明书设置会更好。

Q：酶标仪检测吗？

A：带有化学发光模块的可以。

Q：加入检测试剂后，产生的荧光稳定吗？多长时间内检测数据是准确的？

A：加入后萤火虫信号会有荧光猝灭的情况，越快越好，尽量 5min 内检测完成。

Q: 为啥11401试剂盒里要裂解细胞，40901这个单独的底物不需要啊？

A: 1、荧光素酶是表达在细胞内，是一种不存在于人类物种的水解酶（所以本底很低），它不能透膜。荧光素酶的底物是环状小分子，是疏水的，因而可以透膜的，因此只要存在荧光素酶表达，那必然是外源的，那么将底物加到细胞培养基中或打到体内均能得到信号。

2、报告基因体外检测需要细胞裂解是为了避免细胞转染异质性、底物渗透不均匀和信号不均一而强行匀质化的做法。体外报告基因检测是一个定量且灵敏度很高的实验，报告基因检测需要ATP和氧气的存在，裂解细胞是需要把表达的荧光素酶完全释放出来，能够有更好的反应，因为细胞内的氧气含量有限，如果不裂解，会导致信号一定程度的降低（有的裂解液也做了一些优化，比如额外加了ATP以提高信号等）。因此报告基因体外检测裂解细胞能够有更好的信号；

3、活体成像，检测仪器功率大，能够透过皮肤，细胞，有更强的穿透力，因此可以不用裂解细胞就可以检测到很强的荧光信号，还有就是活体成像检测比较糙，精准度都是相对的，