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非洲猪瘟病毒(ASFV)——全预混/直扩qPCR诊断解决方案

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪或野猪引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,其发病率和死亡率可达100%,严重危害着全球养猪业,造成难以估量的经济损失。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,我国将其列为一类动物疫病。

 

目前非洲猪瘟还未有疫苗和有效的治疗手段,通过实验室诊断方法对非洲猪瘟进行快速、准确的诊断,对于防止疫病的传播至关重要。在实验室检测技术中,qPCR法是OIE推荐使用的非洲猪瘟常规诊断的重要工具,也是中国在现阶段非洲猪瘟流行情况下首选的检测技术。

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图1. Yeasen非洲猪瘟qPCR产品
 
 

产品优势:

操作高效便捷——预混合Mix,无需繁琐操作,一步添加

检测灵敏度高——基因改造的抗体法热启动 Taq 酶,3 copies/反应稳定检出,高灵敏度助力精准“拔牙”

预混稳定性强——预混37℃放置7天、反复冻融性能稳定

试剂批间差小——4个不同批次进行20次重复,CV<1%

血液耐受性好——可耐受抗凝剂样本(EDTA、柠檬酸钠)及0.5%全血

多平台均适用——Bio-Rad CFX96、ABI Q5及Slan均适配

 

ASFV检测解决方案一:

UDG全预混qPCR,超强稳定性

 
产品搭配:磁珠法拭子样本病毒DNA/RNA提取试剂盒(Cat#18300)+超强全预混稳定性qPCR试剂(Cat#13171)
 
1.MolPure® Magnetic Swab Viral DNA/RNA Kit(Cat#18300)
 
2.Hieff Unicon® C55P1 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG plus)(Cat#13171)
 

产品优势:

1.UDG防污染体系
2.超强全预混稳定性
3.高扩增效率,重复性好
4.多平台多体系适用
 

案例展示:

超强全预混稳定性

将Cat#13171配制成含引物探针的全预混液,分别在37℃放置7天,反复冻融15次,对ASF质粒体系进行扩增。结果证明,37℃放置7天,对Ct值和灵敏度均无任何影响,且反复冻融15次后Ct值无明显变化。
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图2. Yeasen(Cat#13171)全预混37℃及冻融稳定性稳定性
 

试剂稳定,重复性好

选取Yeasen 探针法qPCR Mix 4个不同批次做20次重复试验,对非洲猪瘟ASFV质粒体系进行扩增,发现Ct值无明显差异,CV小于1%。
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图3. 重复性测试
 

多平台,多体系适用

分别使用Yeasen qPCR Mix在Bio-Rad CFX96、ABI Q5及Slan平台上对非洲猪瘟ASFV/ACT双质粒进行扩增,可以看到Yeasen qPCR Mix适配各种机型的仪器,且数据可靠稳定。
 
1.Bio-Rad CFX96 Real-Time PCR System
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2.ABI Q5 Real-Time PCR System
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3.Slan Real-Time PCR System
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 图4. 不同机型下的qPCR结果
 

ASFV检测解决方案二:

免提取直扩qPCR,操作更便捷

产品搭配:核酸释放剂(Cat#13720)+耐抑制qPCR预混液(Cat#11211)
 
1.Nucleic Acid Release Reagent V2 (Cat#13720)
 

产品优势:

 
1.一步法免提取,无需加热或提取纯化
2.样本适用范围广,血清、血浆、肺泡灌洗液及拭子样本均可
3.快速裂解,室温仅需10min
4.可室温运输和保存,4℃长期储存,适合基层养殖场
 
2.Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (Cat#11211)
 

产品优势:

1.血液杂质耐受性强
2.超高灵敏度
3.超强稳定性
 

案例展示:

血液杂质耐受性强,应用范围广

分别检测Yeasen 探针法qPCR Mix及各品牌qPCR试剂对血液样本中抑制物的耐受性,结果发现,对于EDTA、柠檬酸钠,Yeasen 探针法qPCR Mix显示有很高的耐受性,且可以耐0.5%的全血。
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图5. Yeasen(Cat#11211)及各品牌同类型试剂在不同血液杂质背景中的耐受能力表现
 

超高灵敏度,3copies/反应稳定检出

使用ASFV引物探针,对ASFV单质粒(终体系3 copies)进行20个复孔的检测,比较各个品牌试剂的检出率,可以看到Yeasen产品的检出率更高。
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图6. ASFV单质粒(终体系3 copies,20个复孔)检出率比对
 

超强稳定性,7天性能稳定

非洲猪瘟ASFV/ACT双质粒体系,在4℃、25℃和37℃下分别放置7天后,Ct值和荧光值不变化,性能稳定。
 
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图7. ASFV单质粒稳定性
 

ASFV检测解决方案三:

等温扩增PCR,快速更高效

 

产品搭配:Bst DNA Polymerase(Cat#12908)+热敏UDG酶(Cat#10303)

 

1.Bst DNA Polymerase Bst DNA聚合酶 (Cat#12908

 

产品优势:

1.高扩增效率

2.高产量扩增

3.dUTP耐受性

 

2.Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG),heat-labile,1 U/μL (Cat#10303)

 

产品优势:

1.对温度敏感、易于灭活

2.较常规UDG酶大幅度降低对含dU扩增产物的降解作用

 

案例展示:

使用翌圣和进口品牌N*的同类型Bst DNA聚合酶,扩增结果表明Ct值和荧光强度无显著差异。

 

完美替代进口品牌N*产品

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图8. 不同品牌同类型Bst DNA聚合酶的扩增曲线

 

 

产品订购

类型

描述

名称

货号

样本提取试剂

直扩免提取

MolPure® Magnetic Swab Viral DNA/RNA Kit

18300ES

磁珠法提取

Nucleic Acid Release Reagent V2

13720ES

检测预混液

全预混(含UDG)

Hieff Unicon® C55P1 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)

13171ES

耐抑制高灵敏度

Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix

11211ES

单酶

等温扩增

Bst DNA Polymerase

12908ES

热敏UDG酶

Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile

10303ES

 
 

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类型
描述
名称
货号
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外切酶活性封闭抗体
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31302ES
 
 

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