链霉亲和素(Streptavidin)是一种由同一亚基组成的四聚体蛋白。每个亚基与一个生物素分子结合,具有高度的亲和力和特异性。蛋白或者抗体一旦生物素化,便可以结合在链霉亲和素修饰的固相基底,如磁性材料或者是琼脂糖上,进行免疫共沉淀,结合在树脂柱或者平板表面用作ELISA。
Streptavidin Agarose Resin 6FF将链霉亲和素固定在高度交联的6%琼脂糖表面,主要用来纯化亚氨基生物素或Strep标记的蛋白、抗体、核酸等物质,或者是固定生物素化蛋白后分离其他蛋白,如免疫沉淀。
表1 Streptavidin Agarose Resin 6FF亲和介质产品特性
参数 |
指标 |
基质(Matrix) |
高度交联的6%琼脂糖微球 |
配体(Ligand) |
链霉亲和素 |
粒径(Bead size) |
45-165 µm |
载量(Capacity) |
>200 nmol Biotin/mL介质 |
最大压力(PressureMax) |
0.3 MPa,3 bar |
pH稳定范围(pH range) |
2-10 |
1、直接快速分离任何生物素化分子,应用广泛,使用灵活。
2、专一性高,非特异性干扰少,结合稳定。
3、纯化树脂材质稳定。
4、结合容量高。
5、Streptavidin Agarose Resin 6FF可特异性结合多种标签,如下表所示。
表2 链霉亲和素可特异性结合的标签
名称 |
结合能力 |
蛋白纯化洗脱条件 |
推荐应用 |
生物素 |
强 |
强力变性缓冲液 |
固定生物素化抗体纯化抗原,或固定生物素化蛋白来分离其他蛋白,如免疫沉淀 |
2-亚氨基生物素 |
较强 |
酸性pH=4 |
纯化带此标签的蛋白,可重复使用。 |
可断裂的生物素化试剂 |
强 |
还原条件下 |
纯化带此标签的蛋白 |
Strep-tag II |
弱 |
用生物素竞争洗脱 |
纯化带此标签的蛋白 |
Twin-Strep-tag |
较弱 |
用生物素竞争洗脱 |
纯化带此标签的蛋白 |
1、平衡,使填料处于和样品一样的缓冲环境
2、上样,通过重力将样品上样至色谱柱结合
3、洗杂,除去非特异性结合的杂蛋白
4、洗脱,将结合的目的蛋白从填料上洗脱
图1 Streptavidin Agarose Resin 6FF纯化亚氨基生物素标签蛋白结果电泳图
图2 Streptavidin Agarose Resin 6FF纯化Twin-Strep-tag标签蛋白结果电泳图
问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
清洗树脂。 |
裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,或离心去除。 |
||
样品太黏稠 |
样品中含高浓度的核酸,延长破碎时间直至粘度降低,或添加DNaseI (终浓度为5µg/ml),Mg2+(终浓度1mM),冰上孵育10-15min |
|
缓冲液太黏稠 |
有机试剂或蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速。 |
|
洗脱组分中无目的蛋白 |
过度的裂解使目的蛋白变性 |
使用温和的裂解条件,实验条件以经验为准。 |
目的蛋白聚集产生沉淀 |
在细胞裂解前溶液中加入DTT,终浓度为1-10 mM |
|
目的蛋白没有完全洗脱下来 |
洗脱体积太少 |
增加洗脱液体积,减小洗脱流速。 |
洗脱液中盐酸胍的pH 发生改变 |
使用新鲜配制的洗脱液 |
|
洗脱液孵育时间不够 |
增加洗脱液与凝胶的孵育时间 |
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格(元) |
20512ES08 |
5 mL |
1586.00 |
|
20512ES25 |
5 mL×5 |
6356.00 |
|
20512ES60 |
100 mL |
16796.00 |
|
BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML 生物素分子纯化预装柱,1ML |
20513ES03 |
1 mL |
428.00 |
20513ES08 |
1 mL×5 |
1328.00 |
|
BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5ML 生物素分子纯化预装柱,5ML |
20514ES08 |
5 mL |
1158.00 |
20514ES25 |
5 mL×5 |
4958.00 |
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格(元) |
47503ES03 |
1 mL |
728.00 |
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