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分子诊断加速器!可靠冻干RT-qPCR试剂原料

近几年,分子诊断快速兴起,促进了国内检验技术的发展。目前该技术已广泛应用于疾病检测、基因检测、病毒和病原菌检测、食品安全检测、遗传检测、动物检测,环境检测等各个领域。

 

众所周知,传统分子诊断试剂存在运输和保存的难题。为确保试剂内有效成分(DNA酶、反转录酶等)的生物活性,一般需要在-20℃左右的冷链环境中储运。冷链运输的需要大量的冰袋或干冰,成本较高,而且环境温度的变化容易造成检测试剂反复冻融,会直接影响试剂的性能和保质期。

 

 

那么,是否有更方便安全的

存储和运输的方式呢?

经深入研究,发现将液体试剂

冻干成固体试剂将能很好解决上述问题

 

冻干试剂优势
 

可常温运输和储存,更长的保质期

 

随来随测,不同品种同时上机,不同品类同时检测

 

提高效率,控制成本:常温、长期稳定;快速配送、便捷使用

冻干试剂研发风险
 

绝大部分的溶液都可以开发成冻干剂型,但是存在一定的风险,原料及保护剂、冻干工艺、冻干设备性能深度跨越、相互干扰,这种领域交叉相互干扰会导致研发周期失控。由此可见,冻干绝不是简单的工艺,每一步都需要慎重选择。

缩短研发周期的关键因素
 

原料厂家的酶和体系,冻干难度有差异,更加重要的是,能否提供足够的技术支持

 

在开发过程需判断:体系干扰、辅料及保护剂影响、工艺和环境干扰

 

翌圣生物提供优质可冻干原料

——让核酸检测更加高效、便捷、经济

 

冻干原料的筛选不是单纯去掉不可冻干物质,原料选择环节需要针对每一个组份进行筛选或调试。切忌盲目寻找可冻干原料;不同原料,冻干工艺及冻干体系都需要相应调整。

 

翌圣生物在此技术上不断加大投入,力求推出优质可冻干原料,帮助客户从原料上解决冻干难题。

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图. qPCR反应体系的组成示意图

 

可冻干原料酶的筛选

 可冻干酶选择误区

 

液体体系中筛选出性能最优的无甘油酶,用于冻干一定没有问题

 

把已有体系中不可冻干的成分去掉就是可冻干体系了

 

冻干过程能够将不可冻干的体系变为可冻干体系

 可冻干酶筛选需注意

 

液体体系中筛选出的性能最优的酶,不一定冻干后性能还是最优,需要多几款候选酶

 

酶的氨基酸序列和修饰差异,会影响酶的空间结构稳定性和冻干耐受性

 

酶的储液直接影响酶的稳定性,可冻干酶需要优化储液以保证酶储存稳定

 

甘油酶去除甘油之后,稳定性、酶活都可能发生极大变化,对应体系需要重调

可冻干反应体系的调整
 

Buffer中不可含有可挥发和易氧化成分

 

需对盐离子浓度进行调试-过高可能造成冻干形态差;过低可能影响扩增性能

 

冻干可能造成pH值变化,影响扩增性能

 

高乘数的试剂利于冻干

 

冻干原料体系中的保护剂含量需明确

 

冻干对酶有一定损伤,补酶量需调试

 

Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2)(CAT#13775)

 

一种无甘油、即用型的分子诊断试剂,含有耐热逆转录酶、热启动Taq DNA聚合酶、反应缓冲液、dNTPs、氯化镁以及冻干保护剂,同时添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子。该产品是开发常温稳定、可室温运输储存、多重RT-qPCR的理想选择。

 

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来源:翌圣生物

 

 
三大优势值得信赖
 

冻干后依然保持酶活性完整,性能和液体试剂一样

 

冻干后室温下保存依然稳定,不需要冷链运输和低温储存

 

降低成本和操作复杂性:提供参考冻干工艺,助力冻干流程;不需要额外添加冻干保护剂,可直接用于冻干

 

部分数据展示

仪器 7500 体系 25 μL
模板 假病毒 模板浓度 105、104、103 copies/mL
程序 50°C 10 min;95°C 5 min;45 cycles (95°C 15sec;60°C 15sec)

 

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图. 13775液体性能:对假病毒模板分别使用高灵敏度版RT-qPCR试剂13110(红色)和13775(蓝色)试剂进行多重RT-qPCR扩增,左为FAM通道,右为VIC通道。

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图. 13775液体试剂热稳定性37℃ 5 Days:将13775液体试剂置于37℃(绿色)和-20℃(蓝色)条件下5天,进行多重RT-qPCR扩增测试,左为FAM通道,右为VIC通道。

 

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图. 13775产品冻干后性能:对假病毒模板分别使用液体试剂(红色)和13775冻干粉(紫红色)进行多重RT-qPCR扩增,左为FAM通道,右为VIC通道。结果表明,冻干后13775试剂活性完好,且依然具有高效多重反应能力。

 

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图. 13775冻干粉热稳定性—37℃ 21 Days:将13775冻干粉置于37℃(绿色)和-20℃(蓝色)条件下21天,进行多重RT-qPCR扩增测试,左为FAM通道,右为VIC通道。结果表明,冻干粉在37℃放置21天后,仍有良好的扩增效果。

400-6111-883