翌圣慢病毒浓缩试剂盒中含有5×浓缩液，能对所有类型的慢病毒颗粒进行简单快速的浓缩。该试剂盒操作简单，仅需将5×浓缩液与慢病毒上清按比例混合并短时间孵育，然后使用普通的离心机离心，即可得到浓缩的慢病毒颗粒，回收率高达90%以上，可提高100倍病毒滴度。

操作步骤

1. 收集慢病毒上清液，0.45 μm滤膜过滤，以除去细胞和碎片。

【注】：如果使用滤膜过滤，只能使用低蛋白结合力的纤维素醋酸酯或聚醚砜（PES）膜。不能用硝酸纤维素膜（NC）。

2. 将慢病毒上清与试剂盒中的浓缩液按照4:1的比例混合（上清液4份，浓缩液1份），4℃孵育2 h或过夜。刚开始时每隔30 min混匀一下，混匀进行3次。

【注】：延长孵育时间可以提高回收率。慢病毒颗粒在4 ℃可以稳定保存数天。

3. 于4℃，4000 g离心25 min。

4. 小心去除上清，不要晃动管子，一般可见白色沉淀（有时沉淀不可见）。

5. 用初始体积（原上清液体积）1/10 - 1/100的DMEM或PBS重悬病毒颗粒，小心吹打均匀，重悬沉淀物。

6. 测定浓缩慢病毒样品的滴度，50 µL/管分装，于-80℃冰箱保存。

【注】：慢病毒冻存液避免反复冻融，否则会降低病毒滴度。

冰袋运输。2～8℃保存，有效期6个月。

Q：病毒 4℃孵育过夜离心后，没有看到沉淀，打算继续孵育到晚上，4℃孵育这个时间可以延长多久?现在来不及做可以再放到晚上吗？有没有最适合的孵育时间建议？

A：4℃孵育的时间放可以延长，吸附的病毒量可以增大，不过同时也会增加吸附杂质的比率，孵育时间可以参考说明书的建议范围。

Q：慢病毒浓缩试剂盒，在 4℃混匀孵育每隔 30min 摇晃混匀一次的这一个步骤，是不是放在 4℃混匀仪上摇晃效果更好？

A：一直摇晃混匀会影响吸附效果，这个过程需要静置吸附的时间。

Q：慢病毒试剂盒大概成分是什么？浓缩效率高吗？2个10cm皿包的慢病毒，加这个浓缩液，能看到沉淀吗？

A：成分PEG，可提高100倍病毒滴度。至于沉淀有没有，要根据客户原始的病毒的总量。

Q：慢病毒浓缩试剂盒，能否去除血清中的BSA等杂蛋白?

A：无法去除杂蛋白，该试剂盒属于生物吸附-PEG浓缩，原理是聚合物沉淀法。

Q：Lentivirus Concentration Solution慢病毒浓缩试剂盒原理是什么？

A：含有聚乙二醇，具有高亲水性，在溶液中会吸收大量水分，减少病毒之间的距离，使病毒聚合在一起，提高病毒的相对浓度，达到沉淀浓缩的目的。

Q:我们的慢病毒浓缩液只针对慢病毒吗？是不是其他的逆转录病毒也可以？因为慢病毒本身就是逆转录病毒改造而成的？

A：慢病毒属于逆转录病毒科，其他逆转病毒也可以。

Q:它适用于其他病毒吗？可以作为通用病毒浓缩液吗？

A：虽然它属于逆转录病毒，但是病毒的整个大类其实很多，不能改成通用病毒浓缩液。

Q：产生的沉淀都是病毒码？

A：白色沉淀的多少并不代表病毒量的多少。白色沉淀中除病毒颗粒外，还有血清蛋白和少量的细胞碎片和基因组DNA等。去除方法，重悬病毒后，4℃ 12,000×g离心3-5min，吸取上清即为浓缩的病毒。

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