泛素结合酶E2D2,也被称为泛素结合酶H5b(UbcH5b),是泛素结合酶(E2)家族中广泛表达的成员。该蛋白的预测分子量为16.5 kDa。UbcH5b/UBE2D2定位于细胞核和细胞质。人类蛋白与小鼠和大鼠同源蛋白的氨基酸序列分别具有100%和92%的同源性。这种酶E2催化核心领域,包含一个活性部位所需的半胱氨酸残基硫酯键的形成与泛素。UbcH5b/UBE2D2能够调解的形成泛素链链接通过Lys11Lys48,或Lys63。使用自洽场(Fbxw2)和MDM2/HDM2泛素连接酶(e3),UbcH5b/UBE2D2分别介导转录因子GCM1和p53的泛素化和降解。与UBE2N/Ubc13一起,UbcH5b/UBE2D2可能在MHCI类分子的内吞和内溶酶体降解中发挥作用。据报道,UbcH5b/UBE2D2对TRIM5-alpha的非蛋白水解泛素化可以阻断HIV逆转录。UBE2D家族成员可能是镉诱导肾毒性的关键靶点。此外,UbcH5b/UBE2D2的过表达与炎症性肠病有关。
反应缓冲液配方
名称 | 组分 | 浓度 |
10 ×Reaction Buffer (200 μL) | Tris PH 8.0 | 500 mM |
DTT | 6 mM | |
ddH2O | to 200 μL | |
10 x ATP-Mg (200 μL) | ATP | 100 mM |
MgCl2 | 100 mM | |
ddH2O | to 200 μL |
参考阳性反应体系
组分 | 体积 (μL) |
ddH2O | to 20 μL |
10 × Reaction Buffer | 2 μL |
10 × E1 Enzyme | 2 μL |
5 × Ubiquitin | 4 μL |
10 × ATP-Mg | 2 μL |
20 × E2 Enzyme | 1 μL |
10 × E3 Ligase Itch (Positive control) | 2 μL |
20 × S5a substrate (Positive control) | 1 μL |
-20℃保存,建议第一次使用时分装冻存。
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