核糖核酸酶(Ribonuclease，RNase)指能水解核糖核酸（RNA）磷酸二酯键的酶，是具有催化功能的核酸内切酶，反应产物为单核苷酸和寡核苷酸。

RNase是一类普遍存在的酶，真核生物、古细菌和细菌中至少存在21种类型的RNA酶，在基因表达和调控、基因组复制和维持、宿主防御、应激反应、病毒感染等生物学过程中发挥重要作用。据报道，RNase能改变宿主细胞新陈代谢，抑制病毒合成，在体外能抑制流感病毒增殖，在鸡胚内能抑制痘苗、疱疹病毒形成。

RNA酶家族包括RNase A、RNase T1和RNase H等。其中，RNase A是使用最为广泛的一种核糖核酸酶，最初是从牛胰腺中发现，可在胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)残基处特异性降解单链RNA。RNase A在多种反应条件下均具有活性，可以切割单链RNA、双链RNA以及RNA-DNA杂交体中的RNA链。

RNase不仅广泛存在于原核和真核生物的组织和细胞中，就连实验环境和许多生物材料中也无一例外。实验室中RNase污染的来源主要包括外源性和内源性两种。常见的外源性污染源有：实验用水与缓冲液、枪头与离心管、酶及其他相关试剂和耗材等；实验大环境的污染，如空气、灰尘和大多数物体的表面；实验人员的毛发、皮肤碎屑、汗液和唾液等。内源性污染源则是指生物样品中含有的内源性RNase。

已知RNase能够催化RNA降解为单核苷酸，且RNA样本中微量的RNase污染也足以导致其完全降解，从而导致有价值的样本丢失或干扰实验。小到研发阶段的单个实验操作、实验室环境，大到生产阶段的商品化试剂、商业化制剂等，都极易发生RNase污染。RNase污染会迅速降解实时荧光定量PCR、cDNA克隆和mRNA合成研发等实验中的重要样本，导致实验数据丢失以及研发的时间成本和费用成本损耗等。因此，RNase污染的检测是分子实验室环境、实验试剂和生物制品的制备等各个环节都需要进行的检项。

RNase污染可以从源头预防，一方面严格控制外源性RNase污染，另一方面最大限度地抑制内源性的RNase。控制外源性RNase污染的方法：操作人员全副武装，实验戴手套，且触摸门把手、普通物体表面后更换手套；使用专业仪器与试剂，尽量使用RNase-free的试剂和耗材；选择RNase-free的实验操作环境等。控制内源性RNase污染的方法：样本保存方面，获取样本后若不直接提取RNA，要及时用液氮冷冻存于-80℃，并尽早开展实验，使RNA的降解最小化；添加抑制剂方面，在细胞裂解液中加入RNase抑制剂，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNase的活性。

随着生物制药行业的快速发展，国家对生物制品的质量安全性管控也更加严格。与此同时，包含新兴的mRNA疫苗研究等在内的生物医药研发型和服务型企业，在药物开发和生产过程中也越来越重视质量把控。

由于RNase无处不在，并且会降解RNA，对许多涉及RNA的研究造成影响。因此，在研发与生产过程中，对外来物料、耗材和环境等进行RNase残留检测成为了关键质控指标。

通过对文献、法规等的调研发现：RNase具体检测方法在《中国药典2020版》、《USP43》和《EP10》等文件中尚无明确规定。

目前，常见的RNase污染检测方法主要有：核酸水解-紫外分光光度法、核酸水解-凝胶电泳法、高效液相色谱(HPLC)和电化学法等。前两种方法均存在检测灵敏度偏低、操作繁琐、通量偏低等缺陷，后两种方法存在耗时费力和受限于仪器设备等缺陷。

通常研发和生产环境以及原料中RNA酶的残留量处于一个未知状态，而研发与生产的进度和品控又需要同时兼顾，这就对RNase检测方法的灵敏度和时效性提出了要求，常见的检测方法很难达到预期效果。

针对上述情况，翌圣生物自主研发了RNase活性检测试剂盒，用于测定待测样本体系整体的RNase残留，满足mRNA领域质量安全控制的需求。本试剂盒采用底物荧光标记法，使用一种新型RNA底物，其一端标记有荧光基团，另一端标记有淬灭基团。加入待测样本后，若样本无RNase污染，则不会产生荧光信号；若有RNase污染，则荧光标记的RNA底物被水解，从而产生逐渐增强的荧光信号。

检测方法多样：可根据实际情况进行定性或定量检测；

符合法规：按照法规要求进行全面验证，可提供验证报告；

灵敏度高：检出限低至可测0.5pg的RNase A；

专属性强：特异性检测RNase含量，不受DNase干扰；

抗干扰强：RNA底物对高低pH和高盐背景溶液耐受能力强

试剂盒可检测具备活性的RNase A浓度范围为：50pg ~ 0.5pg（100μL体系），R2≥0.98，各浓度检测值CV＜15%。

图1. RNase活性检测试剂盒动力曲线和在2min时的标准曲线

[1]国家药品监督管理局药品审评中心.新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则（试行）.2020.

[2]USP. Analytical Procedures for mRNA Vaccines–Draft. 2022.

[3]Thermo scientific RNase A(DNase and Protease-free).

翌圣为您提供RNase活性检测试剂盒（货号41309ES）试用装，每个客户限申请1盒（最终解释权归翌圣生物所有）。

工作人员收到信息后，会在2天内审核，并在5个工作日内派发产品。