各位小伙伴，您是否在蛋白免疫印记时，面对各种内参抗体而不知所措呢，内参蛋白是生物体内管家基因编码的，在多组织中稳定表达，用于验证免疫学实验中是否正常进行和一种半定量检测蛋白表达的标准对照，那么如何正确的选择内参抗体呢！可以从以下几点去参考。
 

一、样本种属来源
 

1. 哺乳动物组织或着细胞来源的样本，一般选择β-actin、α-tubulin、GAPDH、Lamin- B、Histone H3、Na+/K+-ATPase。

2. 植物来源样本，一般选择plant actin、Rubisco等。

3.其他研究较稀少的样本，通过查询相关文献或数据库，选择合适的蛋白作为内参。

 

二、目的蛋白分子量
 

保证目的蛋白分子量与内参相差大于5KDa以上，防止检测时干扰，例如，目的蛋白为40KDa，不宜选择β-actin（42KDa）作内参，可考虑GAPDH (36KDa) 或者β-tubulin(55KDa)作为内参。
 

三、内参蛋白表达部位

 

因此，提取蛋白的部位不同，选择的内参蛋白也不同。比如有时胞质、胞核分开提取而不提取总蛋白时，就要选择相应部位表达的内参蛋白。如 H3在细胞核中高效稳定表达，理论上在细胞质不表达，那么对于胞质提取的蛋白，就不能选用H3作为内参蛋白，而应该选择细胞质中表达的β-actin 、GAPDH α-Tubulin等作为内参蛋白。（内参评价推荐软件geNorm、NormFinder）

 

注意：使用内参抗体需避开以下情况

亚细胞定位	内参	分子量KDa	注意事项
胞浆、全细胞	β-actin	42	不适用于细胞核提取物，因为β-actin是染色质重塑复合物中的组分;可能不适合于研究对象之间年龄差异大的情况
	α-Tubulin	55	可能不适合于研究对象之间年龄差异大的情况，微管蛋白的表达随着抗菌和抗有丝分裂抗性药物而改变，因此在加入抗癌和抗真菌药物时
	β-Tubulin	55
	GAPDH	36	组织细胞缺氧会引起GAPDH表达上调，因此不适用于与氧有关的研究，糖尿病等因素会导致 GAPDH的表达量增高
	Vinculin	117	大分子量蛋白可参考
线粒体	COXIV 系列	15-17	该系列蛋白主要集中于15-17KDa,如果目标蛋白分子量接近，可考虑其他内参
	HSP60	60
细胞核	VDAC1/2	31-37	该系列蛋白主要集中于31-37KDa
	Lamin B1	66	不是适用于胚胎干细胞，凋亡实验中不适合做内参
	PCNA	36	非增值细胞不适用
	TBP	33-43	TBP在人类中是37-43KDa,在小鼠和大鼠中是33-36KDa，不适合凋亡实验
	YY1	65-70
	Histone H3	17	多数蛋白分子量在17KDa左右，如果目标蛋白分子量接近，可考虑其他内参
全血、血清、血浆	Transferrin	77	表达状况受某些疾病状态和治疗的影响，比如视黄酸
	Albumin	66	含量极高，注意降低WB实验上样

 

 

相关产品

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

内参抗体
亚细胞定位	产品货号	产品名称	反应种属	应用
胞浆、全细胞	30201ES	GAPDH (Clone:1A6), Mouse mAb 小鼠抗GAPDH 单克隆抗体	Human,Monkey,Rat,Mouse等	WB
	30202ES	GAPDH, Rabbit pAb 兔抗GAPDH多克隆抗体	Human,Mouse,Rat等	WB,IHC-P,ICC/IF,IP,FC
	30203ES	HRP-conjugated GAPDH (Clone:1A6), Mouse mAb 小鼠抗GAPDH 单克隆抗体，HRP标记	Human,Mouse,Rat	WB，ELISA
	30101ES	β-actin, Mouse mAb 小鼠抗β-actin单克隆抗体	Human,Mouse,Monkey等	WB
	30102ES	β-actin, Rabbit pAb 兔抗β-actin多克隆抗体	Human,Mouse,Rat	WB,IHC-P,ICC/IF
	30103ES	HRP-conjugated β-actin, Mouse mAb 小鼠抗β-actin单克隆抗体，HRP标记	Human,Mouse,Monkey等	WB
	30304ES	α-Tubulin, Mouse mAb 小鼠抗α-Tubulin单克隆抗体	Human,Mouse,Rat等	IF，WB，IHC，IP
	30301ES	β-Tubulin, Mouse mAb 小鼠抗β-Tubulin单克隆抗体	Human,Mouse,Rat等	WB, IHC-F/IHC-P, IF/ICC, ELISA
	30302ES	β-Tubulin, Rabbit pAb 兔抗β-Tubulin多克隆抗体	Human,Mouse,Rat	WB, IHC-P, ICC/IF, FC
	30303ES	HRP-conjugated β-Tubulin, Mouse mAb 小鼠抗β-Tubulin单克隆抗体，HRP标记	Human,Mouse,Rat	WB
	31277ES	Vinculin Rabbit mAb Vinculin兔单克隆抗体	Human,Mouse,Rat	WB, IHC-P
线粒体	30006ES	COXIV Mouse mAb 鼠单克隆抗体	Human,Mouse,Rat等	WB,IHC,FC,IP
	31485ES	Hsp60 Rabbit mAb	Human, Mouse,Rat	WB, IHC-P
细胞核	30000ES	VDAC1 Rabbit pAb VDAC1兔多克隆抗体	Human,Mouse,Rabbit	WB, IHC
	30003ES	Lamin B1 Mouse mAb Lamin B1小鼠单克隆抗体	Human,Mouse, Rat	WB IP IF IHC
	30002ES	PCNA Mouse mAb PCNA小鼠单克隆抗体	Human,Mouse,Rat等	WB IHC ICC IP
	30005ES	Histone-H3 Mouse mAb Histone-H3鼠单克隆抗体	Human,Mouse,Rat等	WB IHC ICC IP
全血、血清、血浆	30001ES	Transferrin Mouse mAb 转铁蛋白小鼠单克隆抗体	Human	WB IHC ELISA
	31273ES	Human Serum Albumin Mouse mAb	Human	WB ELISA

 

文献引用：

[1]Zheng G, Jiang C, Li Y, et al. TMEM43-S358L mutation enhances NF-κB-TGFβ signal cascade in arrhythmogenic right ventricular dysplasia/cardiomyopathy[J]. Protein & cell, 2018: 1-16.

IF（6.228）

[2] Wang T, Wang J, Wang J, et al. HAP1 is an in vivo UBE3A target that augments autophagy in a mouse model of Angelman syndrome[J]. Neurobiology of disease, 2019, 132: 104585.    30101   IF 5.36

[3] Peng RR, Wang LL, Gao WY, et al. The 5.8S pre-rRNA maturation factor, M-phase phosphoprotein 6, is a female fertility factor required for oocyte quality and meiosis. Cell Prolif. 2020;53(3):e12769.  

GAPDH    IF: 5.753

[4] Tan K S, Zhang Y, Liu L, et al. Molecular cloning and characterization of an atypical  butyrylcholinesterase-like protein in zebrafish[J]. Comparative Biochemistry and Physiology  Part B: Biochemistry and Molecular Biology, 2021: 110590.   Flag-Tag (DYKDDDDK), mouse  30503ES20

[5] Zhuang W, Yan Z. The S2–S3 Loop of Kv7. 4 Channels Is Essential for Calmodulin Regulation of  Channel Activation[J]. Frontiers in Physiology, 2020, 11.   30601ES20
[6] Wang Y, Hou Y, Qiu J, et al. Abscisic acid promotes jasmonic acid biosynthesis via a ‘SAPK10 ‐bZIP72‐AOC’pathway to synergistically inhibit seed germination in rice (Oryza sativa)[J].  The New Phytologist, 2020, 228(4): 1336.   GST\HIS\GFP coip

[7] S Chen, et al. Novel Role for Tranilast in Regulating NLRP 3 Ubiquitination, Vascular  Inflammation, and Atherosclerosis JAHA. June 16, 2020 Vol 9, Issue 12 αTUBULIN

[8] Wu L, Gao A, Lei Y, Li J, Mai K, Ye J. SHP1 tyrosine phosphatase gets involved in host defense  against Streptococcus agalactiae infection and BCR signaling pathway in Nile tilapia  (Oreochromis niloticus). Fish Shellfish Immunol. 2020;99:562-571.  β-actin   

[9] Wu F, Xu K, Xu K, et al. Dl-3n-butylphthalide improves traumatic brain injury recovery via  inhibiting autophagy-induced blood-brain barrier disruption and cell apoptosis. J Cell Mol  Med. 2020;24(2):1220-1232.GAPDH  

[10] Liu X , Sun T , Ge Q , et al. Construction of Novel Bispecific Single-Domain Antibodies  (BiSdAbs) with Potent Antiangiogenic Activities[J]. 2020.   GAPDH rabbit antibody