何为内参抗体、何为标签抗体？
一、内参抗体
内参即内部参照（Internal Control），类似于荧光定量实验的内参基因，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由看家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在不同组织和细胞中的表达相对恒定，常用它作为检测目的蛋白表达水平变化时来做参照物。
1. 内参抗体的功能：
（1）检测整个WB流程是否正常
（2）检测基因表达产物是否正确
（3）比较表达产物微量的相对变化
（4）评价各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致
2. 内参抗体的选择：
（1） 样本种属来源
l 哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、NaK、Atpase等。
l 植物来源实验样本，则可以选择plant actin、Rubisco等。
l 根据来源样本选择不同的内参，是WB实验成功的关键。也可参照文献报导，选择合适的蛋白作为内参。
（2）目的蛋白分子量
选择内参抗体时，应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5 KD以上。比如目的蛋白分子量为45 KD，此时不适宜选择β-actin（43 KD）作为内参，可以考虑选择GAPDH或者β-tubulin作为内参。
（3）内参蛋白的表达部位
图1. 不同部位内参蛋白展示图
二、标签抗体
标签抗体的组成一般分为蛋白标签和目的蛋白两部分。标签抗体的合成主要是将蛋白标签是利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。标签抗体（Tag Antibody）可用于检测和纯化各种商品化表达载体上的标签序列，分析目的蛋白的表达含量及其功能。其原理是抗原—抗体反应，这些标签抗体可以高度特异地结合对应的标签融合蛋白。
标签抗体的选择可遵循以下原则：
l 检测蛋白A+His标签，选择抗His抗体；检测蛋白B+MBP标签，选择抗MBP抗体；
标签抗体是开展基因蛋白表达、信号转导和基因功能研究的常用工具。随着技术的不断发展，相继开发得到具有各种不同功能的蛋白标签，常见的蛋白标签有His、Flag、GST、MBP、HA、Myc、GFP 等。
表1. 不同标签功能介绍
|
融合标签 |
大小（KD） |
功能 |
是否切除 |
|
HIS |
0.84 |
有利纯化，能纯化可溶性/包涵体蛋白 |
小标签，不影响蛋白功能 |
|
GST |
26 |
增强可溶性，仅能纯化可溶性蛋白 |
大标签，需切除 |
|
MBP |
44.4 |
增强可溶性，减弱毒性蛋白 |
大标签，需切除 |
|
NusA |
55 |
增强可溶性，减弱毒性蛋白 |
大标签，需切除 |
|
SUMO |
11.2 |
增强可溶性，减弱毒性蛋白 |
大标签，需切除 |
三、翌圣标签抗体与内参抗体
标签抗体
|
货号 |
名称 |
分子量 |
应用 |
WB稀释比例 |
价格（元） |
|
30503ES20 |
20μl |
IF,WB,IP |
1:1000-1:5000 |
248 |
|
|
100μl |
IF,WB,IP |
1:1000-1:5000 |
748 |
||
|
1ml |
IF,WB,IP |
1:1000-1:5000 |
3287 |
||
|
5ml |
IF,WB,IP |
1:1000-1:5000 |
13687 |
||
|
30401ES50 |
50µl |
ELISA, IF, WB, IP |
1:2000-1:20000 |
688 |
|
|
30601ES60 |
100μl |
ELISA, IF, IP, WB |
1:5000 |
748 |
|
|
30701ES60 |
100μl |
WB, IP |
1:10000 |
748 |
|
|
30901ES50 |
50μl |
ELISA, WB, IP |
1:5000-50000 |
688 |
内参抗体
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货号 |
名称 |
规格 |
应用 |
WB稀释比 |
价格（元） |
|
30101ES50 |
50 µl |
ELISA, IF, WB, IHC, FC, IP |
1:5000-50000 |
688 |
|
|
30102ES60 |
100 ul |
ELISA, IF, WB, IHC |
1:1000-10000 |
998 |
|
|
30201ES60 |
20 µl |
ELISA, IF, WB, IHC |
1:10000 |
738 |
|
|
30202ES60 |
100 ul |
WB |
1:2000 |
588 |
|
|
30301ES60 |
100 µl |
IF, WB, IHC ,IP |
1:1000 |
948 |
|
|
30302ES60 |
100 µl |
IF, IHC, IP |
1:5000-10000 |
748 |
|
|
30304ES60 |
100 µl |
WB, IF, IHC, IP |
1:5000-10000 |
948 |
其他常用内参类型推荐
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货号 |
名称 |
分子量 |
品牌 |
|
细胞核膜 |
Lamin A/C |
65-75 KD |
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Lamin B1 |
66-72 KD |
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细胞核 |
YY1 |
65-70 KD |
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TBP |
33-43 KD |
||
|
Histone H3 |
15-17 KD |
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PCNA |
36 KD |
||
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胞浆或全细胞 |
GAPDH |
36 KD |
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β-actin |
42 KD |
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Vinculin |
117 KD |
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β-Tubulin |
50-55 KD |
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α-Tubulin |
50-55 KD |
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膜蛋白 |
ATP1A1 |
97-110 KD |
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线粒体 |
COX412 |
17-20 KD |
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|
COX411 |
17-20 KD |
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Porin |
31-37 KD |
||
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全血/血浆/血清 |
Albumin |
66 KD |
四、标签抗体标记的蛋白纯化产品
1. Anti-Flag亲和纯化凝胶
Anti-Flag亲和纯化凝胶由高质量的鼠源 IgG2b单克隆抗体与Sepharose 4B gel 通过供价偶联制备，本产品具有较高的Flag标签融合蛋白加载容量（至少为1.1mg protein/ml gel），杂蛋白非特异结合少，可用于蛋白质免疫沉淀（IP）和蛋白质纯化。
Anti-Flag亲和纯化凝胶可结合Met修饰的N端Flag融合蛋白（Met-FLAG–Protein），N端Flag 融合蛋白（FLAG–Protein），C端Flag 融合蛋白（Protein-FLAG）。
图2. Anti-Flag亲和纯化凝胶IP后蛋白电泳图
1, 国外品牌 2,Yeasen；抗体浓度：7.5mg抗体/ml凝胶；蛋白结合量：1.25mg蛋白/mL凝胶；蛋白纯度：＞95%
图3. 不同品牌Flag凝胶价格比对图
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货号 |
名称 |
规格 |
价格 |
|
20585ES03 |
Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag亲和纯化凝胶）
|
1ml |
1487 |
|
20585ES08 |
5ml |
4797 |
|
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20585ES25 |
25ml |
20987 |
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20585ES60 |
100ml |
76187 |
2. 琼脂糖凝胶偶联标签抗体
琼脂糖凝胶偶联标签抗体由高质量的鼠源单克隆抗体与Sepharose 4B gel 通过供价偶联制备，具有较高的标签融合蛋白加载容量，杂蛋白非特异结合少，可用于蛋白质免疫共沉淀和少量蛋白质纯化。
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货号 |
名称 |
规格 |
价格（元） |
|
20586ES03/20586ES08 |
1ml/5ml |
1487/4797 |
|
|
20586ES25/20586ES60 |
25ml/100ml |
20987/76187 |
|
|
20587ES03/20587ES08 |
1ml/5ml |
1487/4797 |
|
|
20587ES25/20587ES60 |
25ml/100ml |
20987/76187 |
|
|
20588ES03/20588ES08 |
1ml/5ml |
1487/4797 |
|
|
20588ES25/20588ES60 |
25ml/100ml |
20987/76187 |
|
|
20589ES03/20589ES08 |
1ml/5ml |
1487/4797 |
|
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20589ES25/20589ES60 |
25ml/100ml |
20987/76187 |
3. 标签多肽
蛋白标签是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。Yeasen公司推出的标签多肽可用于与带有相应标签的蛋白竞争性结合anti-标签单抗，以达到纯化标签融合蛋白的目的。
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货号 |
名称 |
规格 |
价格（元） |
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20571ES11/20571ES25 |
4mg/25mg |
2157/9537 |
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20572ES11/20572ES25 |
4mg/25mg |
1237/5587 |
|
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20573ES08/20573ES25 |
5mg/25mg |
1237/5587 |
|
|
20574ES08/20574ES25 |
5mg/25mg |
1237/5587 |
|
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20575ES08/20575ES25 |
5mg/25mg |
1237/5587 |
|
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20576ES08/20576ES25 |
5mg/25mg |
2557/11837 |
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20577ES08/20577ES25 |
5mg/25mg |
2557/11837 |
|
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20578ES08/20578ES25 |
5mg/25mg |
2557/11837 |
|
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20579ES08/20579ES25 |
5mg/25mg |
2157/9537 |
|
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20580ES08/20580ES25 |
5mg/25mg |
2157/9537 |
HB200525
