产品简介
Phleomycin,中文名腐草霉素,由Streptomyces verticillus(轮枝链霉菌)的突变株产生的一种糖肽抗生素,属于博来霉素(bleomycin)家族。抑菌机制在于腐草霉素可结合并插入DNA,从而破坏其双螺旋结构的完整性。腐草霉素对大多数细菌、真菌、酵母、植物细胞和哺乳动物细胞都有活性,尤其适用于对Zeocin敏感性低的细胞,如酵母菌和丝状真菌。
腐草霉素是分子遗传学研究中的选择性抗生素之一,可用于筛选携带Sh ble基因的转染细胞。Sh ble基因来源于Streptoalloteichus hindustanus,其可编码一种14 kDa的蛋白,该蛋白可与腐草霉素强烈结合从而抑制其切割DNA链的活性。腐草霉素是由多种结构类似物构成的复合物,这些复合物仅仅在末端胺基有所差异。另外,因属于铜离子螯合的复合物,溶液呈蓝色。
本品以20 mg/mL的无菌溶液形式提供,可直接用于细胞培养,在0.1-50 μg/mL浓度范围内,腐草霉素可以抑制大多数好氧细胞的生长。
产品信息
货号 |
60217ES20 / 60217ES60 |
规格 |
20 mg / 5 X 20 mg |
CAS号(CAS NO.) |
11006-33-0 |
分子式(Molecular Fomular) |
C55H85O21N20S2Cu•HCl |
分子量(Molecular Weight) |
1525 g/mol |
结构(Structure) |
储存条件
2~8℃或-25~-15℃保存。2~8℃有效期12个月,-25~-15℃有效期18个月。避免反复冻融。
使用说明
【注意事项】
1)细胞对腐草霉素的敏感性受pH值影响,如pH值越高,敏感性越高;另外,对于高渗透压培养基如原生质体再生用的培养基,腐草霉素的活性会明显降低2-3倍。因此也可能通过使用低盐培养基来降低腐草霉素使用量。
2)使用前,需将低温存放的腐草霉素置于室温回温,之后低速充分混匀。
1. 大肠杆菌
携带bleomycin抗性基因如Sh ble,Tn5的质粒,一旦转化进入大肠杆菌受体菌如HB101,DH5a,MC1061,赋予其腐草霉素抗性。
腐草霉素抗性的转化子可以在添加5 μg/mL Phleomycin的低盐LB琼脂培养基(Yeast extract 5 g/L,Tryptone 10 g/L,NaCl 5 g/L,Agar 15 g/L,pH 7.5)中进行筛选。加有腐草霉素的平板可于4℃稳定保存1个月。
2. 酵母菌
酿酒酵母的腐草霉素抗性转化子可在添加10 μg/mL Phleomycin的YEPD培养基中进行筛选。
操作步骤:按常规方法进行酵母细胞转化,一旦DNA进入细胞后,用YEPD培养基稀释细胞并置于摇床上培养6 h或过夜,使其抗性性状得以表达。之后将细胞冰浴1 h并涂布培养在添加10 μg/mL Phleomycin的YEPD(pH 7.0)固体培养基上。
3. 真菌
根据转化子对Phleomycin 的敏感性不同,在添加有10-50 μg/mL腐草霉素的再生培养基内进行筛选。先将细胞在4℃孵育过夜然后置于生长温度培养,可提高其对抗生素的敏感性。
4. 植物细胞
根据植物类型不同,选择5-25 μg/mL Phleomycin进行转化子筛选。
5. 哺乳动物细胞
5-50 μg/mL Phleomycin,推荐先通过建立灭杀曲线来确定最佳浓度。与G418做比较,可能需要更长的时间来杀死细胞或者使细胞从平板上脱落,尤其当细胞处于高密度的情况。
依细胞系不同,通常需要5~21天来挑选具腐草霉素抗性的稳定转染细胞。
注意事项
Ver.CN20240112
相关产品推荐:
产品名称 |
产品编号 |
60202ES |
|
60203ES |
|
60204ES |
|
60205ES |
|
60206ES |
|
60210ES |
|
60212ES |
|
60213ES |
|
60214ES |
|
60215ES |
|
60216ES |
|
60217ES |
|
60218ES |
|
60219ES |
|
60220ES |
|
60225ES |
|
60228ES |
|
60230ES |
|
60231ES |
|
60242ES |
推荐商品