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Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒
产品货号:40301ES50
产品规格:40301ES50
产品价格:¥298.00
类别:细胞凋亡与吞噬

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

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    价格(元)

    Cell Cycle and   Apoptosis Analysis Kit

    细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒

    40301ES50

    50T

    -20℃避光

    298.00

    40301ES60

    100T

    -20℃避光

    528.00


    产品描述

    细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)采用了经典的碘化丙啶染色(Propidium staining,即PI staining)方法对细胞周期与细胞凋亡进行分析。

    碘化丙啶 (PropidiumPI) 是一种双链DNA荧光染料,其嵌入双链DNA后可以产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNAPI染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定,根据DNA含量的分布情况,进行细胞周期和细胞凋亡分析。

    PI染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNAG2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化 (DNA fragmentation) 导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失,因此凋亡细胞PI染色后呈现明显的弱染,即荧光强度小于1,在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰,即凋亡细胞峰。

    细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。 细胞发生凋亡时,由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂,产生凋亡小体,使细胞的光散射性质发生变化。凋亡前期,染色质皱缩,细胞密度增加,前向角光散射色显著降低。凋亡后期,细胞产生凋亡小体,前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。

    本试剂盒通常应用于贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测,则必须把组织消化成单细胞状态,才可以进行检测。


    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    40301ES5050T

    40301ES60(100T)

    40301-A

    RNase A Solution

    0.5mL

    1mL

    40301-B

    PI Solution

    0.5mL

    1mL

    40301-C

    Staining Solution

    25mL

    50mL


    运输与保存方法

    运输:冰袋(wet ice)运输。

    保存方法:-20℃避光保存,有效期为2年。

    【注】如果需要在短时间内多次重复使用,可以于4℃避光保存,2个月内有效。


    注意事项

       1)本试剂盒需要使用流式细胞仪进行检测。

       2)细胞处理需轻柔,尽量避免人为的损伤细胞。
       3)为防止不同批次细胞在实验时所处周期不同导致重复性差,可以在实验前进行细胞的同步化处理。实验细胞应处于对数

    生长期,贴壁细胞一般在5080%汇合度时收集为宜。

    4400目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉,留下单细胞,否则会出现人为的多倍体干扰。如果没有条件过滤,请在染色之前将细胞轻弹以分散,再进行染色。

       5)荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

       6)操作碘化丙啶时,应注意防护,保护眼睛、避免吸入。

       7为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    使用方法

             1)细胞样品制备:细胞数量控制在1×105~1 × 106个。

    a)贴壁细胞:小心吸除细胞培养液,用胰酶消化细胞,制备成单细胞悬液。1000 g离心5 min,沉淀细胞,弃上清,用1 mL预冷的PBS润洗细胞一次,离心收集细胞。

    b)悬浮细胞:1000 g离心5 min,沉淀细胞,小心吸除上清。加入1 mL预冷的PBS,重悬细胞,再次离心收集细胞。

    c)组织细胞:将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后,用0.25%的胰酶消化0.5-1 h,经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000 g离心5 min,沉淀细胞。加入约1 mL预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞。如组织难以消化,可加入适量胶原酶。
    2)细胞固定:细胞沉淀用1 mL预冷的70%乙醇轻轻混匀,4℃固定2 h以上或者过夜。接下来1000 g,离心5 min沉淀细

    胞后,用1 mL预冷的PBS重悬。然后再次1000 g离心5 min沉淀细胞。

             3)染色:0.5 mL染色缓冲液(40301-C)中加入10 μL 碘化丙啶储液(40301-B)和10 μLRNase A40301-A)溶液,混匀待用。每个细胞样品加入0.5 mL配置好的碘化丙啶染色  液,轻轻混匀重悬细胞。37℃避光孵育30min,就可以进行流式检测,流式检测最好在5h内完成。

    【注】:配置好的PI染色液在短时间内可以4℃保存,宜当日使用。

             4)流式检测和分析:细胞用400目筛网过滤,用流式细胞仪进行检测,在激发波长488 nm波长处检测,同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析