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400-6111-883
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400-6111-883
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 凋亡检测试剂盒
产品货号:40304ES20
产品规格:20T
产品价格:¥518
类别:细胞凋亡与吞噬

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  • 产品信息 

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    促销价

    Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 凋亡检测试剂盒

    40304ES20

    20 T

    518.00

    386.00

    40304ES50

    50 T

    1120.00

    786.00

    40304ES60

    100 T

    1960.00 

    1346.00


    产品描述


    Annexin V-Alexa Fluor 647/PI细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit)是用Alexa Fluor 647标记了的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

    其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

    另外,本试剂盒中还提供了碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Alexa Fluor 647 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。


    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    40304ES2020T

    40304ES5050T

    40304ES60100T

    40304-A

    Annexin V-Alexa Fluor 647

    100 μL

    250 μL

    500 μL

    40304-B

    PI Staining Solution (20μg/mL)

    200 μL

    500 μL

    1.0 mL

    40304-C

    4×Binding Buffer

    4 mL

    10 mL

    20 mL


    运输与保存方法

    冰袋(wet ice)运输。本试剂盒中所有组分均在4℃保存,Annexin V-Alexa Fluor 647、PI需避光保存。


    使用说明

    1.1 样品染色

    1. a) 悬浮细胞:300g,4℃离心5 min收集细胞。

    b) 贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后,300g,4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。

    2. 配制1×Binding Buffer:用去离子水按1:4 稀释4×Binding Buffer(4mL 结合缓冲液+12mL 去离子水)。

    3. 用预冷的PBS洗涤细胞2次,每次均需300g,4℃离心5 min。

    4. 加入250 μL 1×Binding Buffer重悬细胞,调节其浓度为1×106/mL。

    5. 取100 μL细胞悬液于5mL流式管中,加入5μL Annexin V-Alexa Fluor 647和10 μL PI,轻轻混匀。

    6. 避光、室温反应15 min。

    7. 加入400 μL 1×Binding Buffer,混匀,样品在1小时内用流式细胞仪检测。

    注意:为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。

    1.2 流式细胞仪分析

    Alexa Fluor 647最大激发波长为651 nm,最大发射波长为667 nm;PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm,最大发射波长为615 nm。用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),Alexa Fluor 647为横坐标,PI为纵坐标。每个样采集10,000 events。


    注意事项

    1)由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。

    2)对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-Alexa Fluor 647的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

    3)如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。

    4)试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

    5)Annexin V-Alexa Fluor 647和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。

    HB190619