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400-6111-883
JC-1 线粒体膜电位荧光探针
产品货号:40705ES03
产品规格:1 mg (5 mg/mL)
产品价格:¥615.00
类别:荧光探针/细胞染色

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  • HB171205


    产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    外观

    储存

    价格(元)

    JC-1 线粒体膜电位荧光探针

    40705ES03

    1 mg (5 mg/mL)

    溶液

    -20℃避光保存

    615.00

    JC-1 线粒体膜电位荧光探针

    40705ES08

    5 mg

    红褐色粉末

    -20℃避光保存

    2450.00


    产品描述

    JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电Ψm位的理想荧光探针。JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内,可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内,JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物,聚合物发出强烈的红色荧光(Ex=585 nm, Em=590 nm);不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失,JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中,产生绿色荧光(Ex=514 nm, Em=529 nm)。JC-1不仅可用于定性检测,因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测,因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时,只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。

    JC-1 用于检测细胞的线粒体膜电位时常用的浓度范围为 1~20 µg/mL,对于很多细胞适宜采用的 JC-1浓度为 10 µg/mL


    产品性质

    化学名称(Chemical name

    5,5‘,6,6’-Tetrachloro-1,1‘,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide

    CAS号(CAS NO.

    3520-43-2 

    分子式(Formula

    C25H27Cl4IN4

    分子量(Molecular Weight

    652.23 

    纯度(Purity

    95%HPLC

    外观(Appearance

    红褐色粉末

    溶解性(Solubility

    溶于DMSODMF,不溶于水

    荧光光谱

    Fluorescent spectrum

    单体形式(monomer form):Ex=514 nm, Em=529 nm

    聚合物形式(J-aggregate form):Ex=585 nm, Em=590 nm

    结构式

    22.bmp 


    运输与保存方法

    冰袋(wet ice)运输。

    粉末-20℃干燥避光保存至少一年有效。储存液分装成单次使用量,-20℃干燥避光保存,避免反复冻融,约一年有效。


    使用方法

    1. 工作液配制:

    1JC-1粉末(5 mg):直接加1 mL DMSO到粉末内,室温颠倒混匀使其充分溶解,即得到5 mg/mL的储存液。溶液分装成小量储存于-20,避光干燥,避免反复冻融。

    2)JC-1储存液(1 mg in DMSO):本品是JC-1的DMSO储存液,浓度为5 mg/mL。使用者需要根据单次用量来分装,-20避光干燥,避免反复冻融。

    3)工作液配制:将冻存的储存液置于室温充分融化,之后用缓冲液或者预热的培养基直接稀释储存液(5 mg/mL)到需要的工作液浓度,边震荡边稀释,充分混匀。为了去除任何不溶颗粒,建议13,000 x g离心JC-1工作液1 min,小心吸取上清转移到新的管子内。整个过程要避光操作。注意:因JC-1不溶于水,很可能在稀释到工作液的过程中形成聚集颗粒,则建议细胞染色前用离心或者过滤的方法去除这些颗粒后再使用。

    2. JC-1染色步骤(流式细胞仪)

    1)6-,12或24-孔板上进行细胞铺板,密度为5×105 cells/mL375%CO2培养箱培养过夜。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。 注:进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过1×106 cells/mL,也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。

    2)0.5 mL细胞悬液至无菌的离心管内;

    3)室温条件400 x g离心5 min;吸掉上清。

    4)0.5 mL JC-1工作液重悬细胞,于375%CO2培养箱孵育15-30 min;注意:一般情况,15 min足以进行充分的染色。

    5)室温条件400 x g离心5 min;吸掉上清;

    6)2 mL细胞培养液或者缓冲液重悬细胞,之后室温条件400 x g离心5 min;吸掉上清;

    7)重复步骤6);

    8)0.5 mL新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞,即可进行后续的流式分析。注意:马上进行流式定量分析,此细节很重要。

    数据分析:含有红色JC-1聚集物的健康细胞线粒体用FL2通道检测;含有绿色JC-1单体的凋亡或不健康细胞用FL1(FITC)通道检测。

    3.  JC-1染色步骤(荧光显微镜)

    A. 悬浮细胞

    1)-6)同上JC-1染色步骤(流式细胞仪);

    7)用0.3 mL的缓冲液重悬细胞,即可进行荧光显微镜检测。注意:马上进行荧光显微分析,此细节重要。
          数据分析:使用可同时检测荧光素fluorescein/罗丹明或者荧光素fluorescein/Texas Red的双带带通滤波器进行检测。未凋亡的活细胞因JC-1聚集后线粒体呈红色,最大发射波长为590 nm。凋亡和坏死细胞染料一直以单体形式存在,线粒体呈现绿色。最大发射波长为530 nm。

    B. 贴壁细胞

    1)培养皿内用盖玻片进行细胞爬片或者细胞培养在腔室玻片(chamber slide)上。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。

    2)染色前开始配制JC-1工作液,配制步骤见上。

    3) 吸掉细胞培养液,然后加入足够覆盖所有细胞的JC-1工作液。375%CO2培养箱孵育15-30 min;注意:一般情况,15 min足以进行充分的染色。

    4)吸掉培养液,然后用合适的缓冲液来清洗细胞2次。

    5)加入2 mL细胞培养液(培养液可含有血清和酚红)或者PBS缓冲液,于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下观察。数据分析同A. 悬浮细胞。

    4. JC-1染色步骤(荧光酶标仪)

    1)-7)同上JC-1染色步骤(流式细胞仪);

    9300 μL缓冲液重悬细胞;然后按照每孔100 μL的量将染色好的细胞转移到黑色96孔板内,即可进行荧光酶标板分析。注意:马上进行荧光显微分析,此细节重要。

    数据分析:健康细胞内,JC-1单体聚集形成聚合物,线粒体呈现强烈的红色荧光(激发波长550 nm, 发射波长600 nm)。凋亡或坏死细胞内JC-1以单体形式存在,线粒体呈强烈的绿色荧光(激发波长485 nm, 发射波长535 nm)。然后计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值,用来判断细胞健康程度。


    注意事项

    1)JC-1是光敏感性的,所有染色步骤的操作过程中避免强光接触。

    2)JC-1染色完成后,立即进行后续的结果分析非常必要;

    3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


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