实验所用产品

产品名称	产品货号
Ceturegel®Matrix LDEV-Free基质胶	40188ES

一、组织样本准备与单细胞悬液制备

样本获取与运输：获取患者手术切除的新鲜肿瘤组织样本。样本离体后须在3小时内处理，以确保细胞活性。立即将组织放入含25-30 mL预冷培养基（DMEM，含1% 青霉素-链霉素双抗）的50 mL离心管中，使组织完全浸没。置于碎冰盒中快速转运至实验室。

样本清洗：在生物安全柜中，将组织转移至无菌六孔板中。使用足量DMEM（含1%双抗）溶液反复漂洗组织，仔细剔除附着的黄色脂肪组织、红色血管及其他非目标坏死部分。

组织剪碎：将清洗后的组织转移至预冷的无菌培养皿或小烧杯中，置于碎冰上操作。使用无菌手术剪刀或刀片，快速将组织剪切成尽可能细小的碎片，直至形成可用20 mL注射器针筒抽吸的糊状物。

二、细胞-基质胶混合物的制备

低温操作：所有步骤在冰上或4℃环境中进行，防止基质胶凝固。

等比例混合：将剪切好的组织糊状物与预冷的Ceturegel® 基质胶按 1:1的体积比 在预冷的容器（如使用预冷的注射器针筒）中轻轻但充分混匀，形成均一的悬液。混合过程应迅速，避免产生气泡。

保持低温待用：混合物制备完成后，立即置于冰上保存。从混合到接种的全部过程应尽快完成（建议在30分钟内），以维持细胞活性和防止基质胶聚合。

三、皮下接种操作

动物准备：用电动剃毛器剃除小鼠背部计划接种区域的毛发，并用酒精棉球消毒皮肤。

皮下注射：

组装注射器：将20 mL注射器的针头安装于1 mL注射器针管上，以方便抽吸粘稠混合物。

抽取混合物：用组装好的注射器抽取 0.5-1 mL 冰上保存的组织-基质胶混合物，避免吸入气泡。

接种：牢固抓取小鼠，使注射区域皮肤紧绷。将针头以较小角度（约10-30度）刺入皮下，然后平行于皮肤推进约1厘米形成皮下隧道。缓慢、稳定地将全部悬液注入皮下，形成可见的皮丘。

防止渗出：注射完毕后，等待数秒再缓慢拔出针头，并立即用干棉球或无菌纱布按压注射部位数分钟，以防止混合物溢出。

标记与记录：接种完成后，立即为小鼠填写清晰标签，记录肿瘤来源信息、接种日期及接种体积。将动物放回SPF级饲养笼中。

四、实验结果

接种一个月后，将小鼠安乐死，取肿瘤肿瘤组织测量，长度为23.58 mm，宽度为15.58 mm。

 

（数据来源：合肥综合性国家科学中心大健康研究院）

皮下成瘤实验小贴士

细胞状态优先：确保使用处于对数生长期、活性高（>95%）的细胞。接种前进行准确的细胞计数，并尽量缩短细胞在冰上或悬液状态下的等待时间，以维持最佳活力。

严格低温操作：基质胶在4℃以上会迅速聚合。所有涉及基质胶的步骤（液化、分装、混合）务必在冰上完成，注射器也应预冷，这是防止混合物在针头内凝固、保证注射顺畅的关键。

注射技巧：进行皮下注射时，针头刺入皮肤后应平行于体表推进一小段，形成“隧道”后再缓慢推液。注射后可轻压针孔片刻，能有效防止细胞悬液渗出，确保接种量的准确。

规范监测：待肿瘤可触及后，建议由同一操作者定期、轻柔地使用游标卡尺测量。记录肿瘤的最长径和与之垂直的最短径，并采用统一公式计算体积，以减少人为误差，获得可靠的生长曲线。