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产品描述
LysoSensor®系列探针是对活细胞中的酸性区室（如溶酶体、顶体精子）pH值进行检测的一类荧光探针，该类探针的染色具有向酸性，可通过质子化作用在酸性细胞器内累积。该类探针的这种向酸性可解除染料的荧光淬灭性，使其所发射的荧光强度更强。因此，与LysoTracker系列探针相比，LysoSensor®系列探针随着细胞器的酸化程度其荧光强度呈pH依赖型(向酸)增强。
本品LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160 (PDMPO)是一种用于测定溶酶体pH值的比率测量型探针，也是LysoTracker®系列探针中的一种pH依赖型显示双激发和双发射波长的荧光探针，该探针在中性环境中产生蓝色荧光（Ex/Em=329 nm/440 nm），但当所处环境变为偏酸性时，则发射黄色荧光（Ex/Em=384 nm/540 nm）。本品以溶于无水DMSO的1 mM储存液形式提供。
产品性质
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分子式（Molecular Formula） |
C20H22N4O3 |
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分子量（Molecular Weight） |
366.4188 |
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Ex/Em |
Ex=329 nm, 384 nm Em=440 nm, 540nm |
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pKa |
～4.2 |
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结构式（Structure） |
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运输和保存方法
冰袋运输。-20℃避光干燥保存，避免反复冻融，有效期一年。
注意事项
1. 不能储存在无霜冰箱，建议按照单次用量分装于-20℃冻存。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
使用方法
使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。
1. 工作液的配制
利用培养基或合适的缓冲液将1 mM 储存液稀释至工作浓度，推荐工作液浓度至少为1 µM；
【注1】：1）为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
2）若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。
【注2】：工作液现配现用。
2. 染色
2.1 对于贴壁细胞
1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30 min～2 h（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。
【注】：对LysoSensor™ YellowBlue DND-160 (PDMPO)内化过程的动力学研究表明，活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生“碱性效应Alkalizing effect”，也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1-5 min才可用作pH指示剂。
3）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育30 min～2 h（具体时间需根据细胞类型而定）。
【注】：对LysoSensor™ YellowBlue DND-160 (PDMPO)内化过程的动力学研究表明，活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生“碱性效应Alkalizing effect”，也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1-5 min才可用作pH指示剂。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4）置于荧光镜下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或加长染色时间。
【注】：对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经BD Cell-Tak处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。
HB220308
