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LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160 (PDMPO) 溶酶体黄/蓝色荧光探针
产品货号:40768ES50
产品规格:50μL
产品价格:¥425.00
类别:荧光探针/细胞染色

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  • HB171121


    产品信息

    产品名称      

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160 (PDMPO) 溶酶体黄/蓝色荧光探针

    40768ES50

    50μL

    -20℃避光

    425.00


    产品描述

     LysoSensor®系列探针是对活细胞中的酸性区室(如溶酶体、顶体精子)pH值进行检测的一类荧光探针,该类探针的染色具有向酸性,可通过质子化作用在酸性细胞器内累积。该类探针的这种向酸性可解除染料的荧光淬灭性,使其所发射的荧光强度更强。因此,与LysoTracker系列探针相比,LysoSensor®系列探针随着细胞器的酸化程度其荧光强度呈pH依赖型(向酸)增强。

    本品LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160 (PDMPO)是一种用于测定溶酶体pH值的比率测量型探针,也是LysoTracker®系列探针中唯一的一种pH依赖型显示双激发和双发射波长的荧光探针,该探针在中性环境中产生蓝色荧光,但当所处环境变为偏酸性时,则发射黄色荧光。本品以溶于无水DMSO的1mM储存液形式提供。


    产品性质

    分子式(Molecular Formula)

    C20H22N4O3

    分子量(Molecular Weight)

    366.4188

    Ex/Em

    Ex=329nm,384nm   Em=440nm,540nm

    pKa

    ~4.2

    结构式(Structure)

    6.jpg


    运输和保存方法

    冰袋运输。-20℃避光干燥保存,避免反复冻融,有效期6个月。


    注意事项

    1)不能储存在无霜冰箱,建议按照单次用量分装于-20℃冻存。

    2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

      

    使用方法

    使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。

    1. 工作液的配制

    利用培养基或合适的缓冲液将1mM 储存液稀释至工作浓度,推荐工作液浓度至少为1µM;

    注1为了降低探针加载过度可能引起的假阳性,建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。2)若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育,会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。

    注2:工作液现配现用。

    2. 染色

    2.1 对于贴壁细胞

    1)将细胞置于培养皿中的盖玻片上,加入合适培养基,使其爬片生长。

    2)待细胞生长到合适丰度,吸除培养液,加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30min~2h(具体孵育时间需根据细胞类型而定)。
          注意:对LysoSensor™ YellowBlue DND-160 (PDMPO)内化过程的动力学研究表明,活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生“碱性效应Alkalizing effect”,也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1-5min才可用作pH指示剂。

    3)利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜(含合适滤片)下观察。若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。

    2.2 对于悬浮细胞

    1)离心,吸除上清。

    2)利用37℃预热的探针工作液重悬细胞,于生长状态下孵育30min~2h(具体时间需根据细胞类型而定)。

    :对LysoSensor™ YellowBlue DND-160 (PDMPO)内化过程的动力学研究表明,活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生“碱性效应Alkalizing effect”,也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1-5min才可用作pH指示剂。

    3)离心,吸除染色液,加入新鲜培养液重悬细胞。

    4)置于荧光镜下观察。若染色不够充分,建议增加染料浓度或加长染色时间。

    :对于悬浮细胞,也可将细胞贴附于经BD Cell-Tak处理过的盖玻片上,然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。

     

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