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Alexa Fluor®488 NHS Ester (Succinimidyl Ester) Alexa Fluor 488-N-羟基琥珀酰亚胺酯
产品货号:40779ES03
产品规格:1mg
产品价格:¥2768.00
类别:荧光探针/细胞染色

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  • HB171121


    产品信息

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    产品编号

    规格

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    价格(元)

    Alexa Fluor®488 NHS Ester (Succinimidyl Ester)

    Alexa Fluor 488-N-羟基琥珀酰亚胺酯

    40779ES03

    1mg

    -20℃避光

    2768.00


    产品描述

          Alexa Fluor® 488 是一种亮绿色荧光染料,具有水溶性和较强的pH稳定性(pH4-10),可被488nm激发产生信号稳定的荧光,常作为一种细胞标记物偶联到抗体、多肽、蛋白、示踪剂和其他底物上广泛用于细胞成像和检测。 

    Alexa Fluor® 488 NHS Ester,即含N-羟基琥珀酰亚胺(N-Hydroxysuccinimide)活化基团的Alexa Fluor 488,可直接与生化分子上的氨基(-NH2)反应形成稳定的酰胺键,主要是伯胺,可用于标记任何含伯胺的蛋白、多肽、氨基修饰的寡核苷酸或者其他含氨基的生物分子。


    产品性质

    荧光团(Fluorophore Label)

    Alexa Fluor® 488 dye

    活性基团(Reactive Group)

    NHS ester

    反应性(Reactivity)

    伯胺(R-NH2

    分子式(Molecular Formula)

     C25H15Li2N3O13S2

    分子量(Molecular Weight)

     643.4

    外观(Appearance)

    粉末

    Ex/Em

    494/517 nm

    摩尔吸光系数(Extinction Coefficient)

    71,000 cm-1M-1

    校正因子(CF280

    0.11

    结构式(Structure)

    5.jpg


    运输和保存方法

    冰袋运输。-20℃干燥避光保存,有效期至少3个月。


    注意事项

    1)NHS ester基团对湿度非常敏感,务必干燥保存产品。使用前产品需放到室温回温至少20min。
    2)NHS ester基团的水解发生在水溶性缓冲体系属于竞争性反应。对蛋白/多肽伯胺的连接反应建议在pH 7-9范围内进行。

    3)不要使用任何含伯胺的缓冲液,比如Tris,甘氨酸、铵盐、或其他稳定蛋白如BSA等。

    4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

     

    标记方法(以IgG为例)

    注意:该染料可标记任何蛋白,此方案是以IgG为例进行优化的,可根据需要按照该方案调整合适的体系。

    1. 用1mL不含氨基的合适的缓冲液(eg.100mM碳酸氢钠缓冲液)充分溶解约10mg蛋白。

    标记的效果具有浓度依赖性,当浓度低于2mg/ml,会严重影响标记效率,标记蛋白浓度需控制在2-20mg/mL
    标记体系应避免任何含氨基的底物,如Tris、glycine、铵盐、或其他稳定蛋白如BSA等,如待标记的蛋白溶液中含有上述物质的污染,则需透析到10-20mM的磷酸盐缓冲液(PBS)中,再向每毫升蛋白溶液中加入0.1mL 1M碳酸氢盐缓冲液(pH 8.3–9.0)调至所需pH值。
    抗体溶液中存在的微量叠氮钠(<3mM)或硫汞撒(<1mM)不会干扰标记反应。

    2. 使用前用高质量无水DMSO溶解Alexa Fluor 488-NHS至10mg/mL。
    注:Alexa Fluor 488-NHS虽然具有水溶性,但是在水溶液中,会被水解成非活性游离酸。因此一旦溶解,该染料活性就可能减弱,尤其是在水溶液中,本品就会变得很不稳定。

    3. 向蛋白样品中缓慢加入50-100µLAlexa Fluor488-NHS试剂,充分混匀。
    :加入Alexa Fluor488-NHS试剂的量在0.5-1mg。不同的蛋白和标记试剂的标记效果不同,请根据具体情况优化染料与蛋白的比例。

    4. 边搅拌边于室温孵育60min(或更长);

    5. 利用合适介质去除未反应的试剂;

    6. 测定Alexa Fluor® 488-蛋白标记效率(DOL)和标记浓度。

    ① 测定A280和A494:利用1cm路径的比色皿检测标记物在280nm和494nm的吸光值,此处可根据需要对样品进行稀释。

    ② 计算样品中蛋白的浓度:

    6.jpg

    ε280 is molar extinction coefficient protein(M-1cm-1)at 280nm. ε280 of Alexa Fluor 488 is 71,000.

    CF is a correction factor to account for absorption of the dye at 280 nm.CF= A280 free dye/Amax free dye .  CF280(Alexa Fluor® 488)=0.11.

    ③ 计算DOL值:

    7.jpg

    ε494 is the approximate molar extinction coefficient of the Alexa Fluor® 488 dye at 494 nm.

     

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