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Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒
产品货号:40754ES60
产品规格:100次
产品价格:¥1153.00
类别:荧光探针/细胞染色

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  • HB170227


    产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit  细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒

    40754ES60

    100次

    -20℃

    1153.00


    产品描述

    细胞衰老(Cell senescence)是细胞控制其生长潜能的保障机制,一般含义是复制衰老(Replicative senescence,RS),指正常细胞经过有限次数的分裂后,停止分裂,此时细胞虽然是存活的,但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括:1)不可逆的生长停滞;2)与衰老相关的β-半乳糖苷酶(senescence associated β-galactosidase, SA-β-gal)的活化。作为溶酶体内的水解酶,通常在pH 4.0的条件下表现活性,但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性,且随着传代次数的增加,细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。

    本试剂盒正是基SA -β-gal活性变化的生物学特征而设计的,以X-Gal为底物,在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下生成深蓝色产物,从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。

    本试剂盒可以培养细胞的衰老检测,也可以用于组织切片的衰老检测。产品性能稳定,参数经优化,着色敏感,特异性高。仅对衰老细胞进行染色,不会染色衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞。


    产品组分

    组分编号

    组分名称

    规格

    保存

    40754-A

    β-半乳糖苷酶染色液A

    1 mL

    -20℃保存

    40754-B

    β-半乳糖苷酶染色液B

    1 mL

    -20℃保存

    40754-C

    β-半乳糖苷酶染色液C

    100 mL

    -20℃保存

    40754-D

    β-半乳糖苷酶染色固定液

    100 mL

    -20℃保存

    40754-E

    X-Gal溶液

    5 mL

    -20℃避光保存


    运输与保存方法

    冰袋运输。-20℃保存,一年有效,其中X-Gal溶液需避光保存。


    注意事项

    1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    2)本试剂盒β-半乳糖苷酶染色固定液存在一定的腐蚀性和毒性,操作时请注意小心防护。
    3)细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH值,不能用于细胞培养的CO2培养箱中进行染色反应。因为CO2培养箱中较高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值,导致染色失败。
    4)40754-B刚溶解后会观察到有沉淀,属正常现象,充分混匀或者漩涡震荡可促使沉淀全部溶解,之后才能用于染色实验。配置染色工作液时,也可能有少量絮状沉淀出现,震荡混匀后就会完全溶解。在染色前一定要确保所有的试剂处于完全溶解状态。

    5)X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的细胞样品可以在4ºC冰箱保存,但也需避免光照。

     

    使用方法

    1. 实验前的准备工作:

    1)染色工作液配制

    实验开始前,将试剂盒内各组分从冰箱内取出,彻底溶解。其中X-Gal溶液最好置入冰槽里等待溶化。根据表1进行染色工作液的配置,实验体系类型,检测样本数,统一配制单次实验需要的染色工作液总量。
    表1 染色工作液配方表

    β-半乳糖苷酶染色液A

    10μL

    β-半乳糖苷酶染色液B

    10μL

    β-半乳糖苷酶染色液C

    930μL

    X-Gal溶液

    50μL

    注:配制染色工作液时需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器,不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器,对于二者的判定:聚丙烯容器可高压灭菌,而聚苯乙烯容器则不可高压灭菌,一旦高温高压处理就会严重变形。但是染色过程可以在聚苯乙烯容器内进行,如细胞培养常用的6孔板。

    2. 6孔细胞培养板染色(贴壁细胞):

    1)吸除细胞培养液,用PBS/HBSS洗涤细胞1次,加入1mLβ-半乳糖苷酶染色固定液。室温固定15min。
    注:对于其它类型的培养板,固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。

    2)吸除固定液,用PBS/HBSS洗涤细胞3次,每次3min。

    3)吸除PBS/HBSS,每孔加入1mL预热的染色工作液,覆盖整个生长表面。

    4)37℃孵育过夜,可以用封口膜或保鲜膜封住6孔板防止液体蒸发。
    注:37℃孵育不能在CO2培养箱中进行,因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值,导致染色失败。
    5)普通光学显微镜下观察和计数:表达SA β-gal的细胞为阳性细胞,呈现蓝色。如不能及时观察计数,可以去除染色工作液,加入2mL PBS缓冲液,4℃可以保存数天,或者加入封片剂封片后,4℃可保存较长时间。

    3. 悬浮细胞染色:
    1)离心收集细胞至1.5mL离心管内,用PBS/HBSS洗涤1次,加入1mLβ-半乳糖苷酶染色固定液。室温固定15min。固定时可以在摇床上缓慢摇动,以避免细胞结成团块。

    2)离心,吸除细胞固定液,用PBS/HBSS洗涤细胞3次,每次3min。

    3)离心,吸除PBS/HBSS,每管加入0.5-1mL预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。

    4)37℃孵育过夜。
    注:37℃孵育不能在CO2培养箱中进行,因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值,导致染色失败。
    5)取部分染色好的细胞,滴加到载玻片上或6孔板内,普通光学显微镜下观察和计数。如不能及时观察计数,可以离心,去除染色工作液,加入1mL PBS缓冲液,4℃可以保存数天。也可取细胞用于涂片,加上封片剂封片后,4℃可保存较长时间。

    4. 组织切片染色:

    1)对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡或水化处理。对于冰冻切片直接按照以下步骤进行;

    2)加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液,以充分盖住组织为宜,室温固定不少于15min。

    3)用PBS浸泡洗涤组织3次,每次不少于5min;

    4)吸除PBS,加入适当量的预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。

    5)37℃孵育过夜,可以用封口膜或保鲜膜封住防止蒸发,最好把整个切片浸泡在染色工作液中。
    注:37℃孵育不能在CO2培养箱中进行,因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值,导致染色失败。

    6)普通光学显微镜下观察和计数。如不能及时观察计数,加上封片剂封片后4℃可保存较长时间。