您好,欢迎来到上海翊圣生物科技有限公司官方网站!
400-6111-883
| EN
400-6111-883
PI(Propidium Iodide)碘化丙啶染液(1mg/mL)
产品货号:40710ES03
产品规格:1mL
产品价格:¥265.00
类别:荧光探针/细胞染色

说明书下载

  • HB180720


    产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    PI(Propidium Iodide)碘化丙啶染液(1mg/mL

    40710ES03

    1mL

    4 ºC避光保存

    265.00


    产品描述

    碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一种常用的细胞核荧光染料,作为一种溴化乙锭(EB)的类似物,能够嵌入碱基之间实现与DNA结合。这种结合没有或者几乎无序列倾向性,大约每4-5个DNA碱基对结合一个染料。PI也能与RNA结合,需要用核酸酶处理来区分DNA和RNA染色。水溶液中PI的最大激发/发射波长是493/636 nm。一旦与核酸结合,荧光信号明显增强20-30倍,最大激发波长向红色波段迁移~30-40 nm,最大发射波长向蓝色波段迁移~15 nm,从而使其最大激发/发射波长变为535/617 nm。PI的摩尔吸光系数相对比较低,但是其具有足够大的斯托克司频移来同时检测核酸DNA和荧光标记抗体,只需要使恰当的滤片。PI适用于荧光显微镜,共聚焦显微镜,流式细胞仪以及荧光计分析。

    PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外,但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。利用这一特性,通常与Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活细胞荧光探针一起使用,同时对活细胞和死细胞染色和鉴定,用于细胞凋亡相关的研究。也可以用作多重荧光染色的复染剂,兼容于各种细胞标记技术,包括直接或者间接的荧光抗体检测,mRNA原位杂交,细胞结构特异性的荧光探针检测法以及组织染色。PI的单独染色也可以进行细胞周期的检测。

     本品是溶于水的PI 储存液,浓度为1mg/mL,只需用合适的缓冲液稀释到工作液即可。


    产品性质

    英文同义名(English synonym)

    2,7-Diamino-9-phenyl-10 (diethylaminopropyl)-phenanthridium iodide methiodide.

    CAS号(CAS NO.)

    25535-16-4

    分子式(Formula)

    C27H34I2N4 

    分子量(Molecular Weight)

    668.4

    外观(Appearance)

    暗红色结晶

    纯度(Purity)

    ≥95% by HPLC

    溶解性(Solubility)

    溶于水(1 mg/mL

    荧光光谱 (Fluorescence Spectral)

    水溶液,PI的Ex/Em= 493/636 nm;PI-核酸的Ex/Em= 535/617 nm;荧光可用氙气灯,泵弧灯或者488 nm氩离子激光激发。通常情况下,用流式细胞仪的FL2通道检测。

    结构式(Structure)

    图片1.png


    运输与保存方法

    冰袋(wet ice)运输。4 ºC避光保存,至少6个月稳定。

    注意事项

    1)碘化丙啶(PI)是已知的诱变剂,因此PI溶液在丢弃之前需要先经过活性炭处理。

    2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操


    使用方法

    1. 贴壁细胞复染步骤(荧光显微镜检测)
    1) 样本准备:根据自身样本选择合适步骤固定细胞。PI染色一般在其它染色完成后再进行。PI复染要求细胞经透化处理。
    2) RNase酶处理:若样本使用多聚甲醛,甲醛或者戊二醛固定,则需要进行RNase处理。若样本用甲醇/醋酸或者丙酮固定,通常不需要此步操作。a,于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本;b,将本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20 min;c,用2×SSC溶液清洗样本3次,每次1 min。
    3) 复染:a,于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本;b,直接用2×SSC稀释1 mg/mL(1.5 mM)PI储存液 1:3000,得到500 nM的PI工作液。通常添加300 µL染液足够用于一个盖玻片细胞制片。染色1-5 min。c,2×SSC清洗几次,流尽多余液体,加入抗淬灭剂封片(Yeasen,Cat#36308ES08)。d,选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。

    2. 悬浮细胞复染步骤(流式细胞仪检测)

    1)样本准备:根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。或者使用如下的步骤:
    a. 收集细胞,密度约2×105~1×106。离心上清,轻弹管壁就剩下的液体重悬细胞。加入1 mL常温存放的PBS;
    b. 将所有的重悬细胞转移到4 mL-20ºC预冷的无水乙醇,在高速涡旋混匀的同时一边用枪缓慢的添加细胞悬液到乙醇内。于-20ºC乙醇中固定5-15 min。

    c. 离心收集细胞,除去乙醇。轻弹管壁以弹松细胞后,加入5ml室温的PBS。允许细胞水化15 min;

    2)复染
    a. 用染色液(100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 , 0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet® P-40)稀释1 mg/mL(1.5 mM)PI储存液 1:500,得到3 µM的PI工作液。1 mL的PI染色液足够用于每个细胞样本的检测。【注】:工作液的使用浓度可以根据自身实验体系调整,也可以直接使用PBS,HBSS等缓冲液直接稀释PI储存液到需要的浓度。
    b. 样本制备的最后一步后离心收集细胞,去除上清,用手轻弹管壁以弹松细胞后,加入1 mL的PI染色工作液。室温孵育15 min后,流式细胞仪进行细胞分析。若用显微镜观察,则需要离心样本,去除上清并重悬细胞在新鲜的缓冲液中。吸取1滴悬液到载玻片上,盖上盖玻片后观察。

    3. 染色质FISH复染步骤
    1)样本准备:根据标准步骤制备样本。复染之前的最后一步用去离子水清洗样本以去除玻片上残留的缓冲。室温晾干。此步骤有助于减少非特异性的背景染色。

    2)复染
    a. 工作液的配制:用PBS缓冲液直接稀释1 mg/mL(1.5 mM)的PI储存液1:1000,得到1.5 µM的PI染色工作液。滴加300 µL的工作液直接到样本。有必要的话,工作液内加入新鲜制备的RNase A(终浓度:10 µg/mL)。可使用塑料盖玻片均匀分布染液在载玻片上。室温避光条件下孵育样本30 min;如果加入RNase则37ºC孵育。

    b. 去除盖玻片,用PBS或去离子水清洗以除去没有结合的染料;
    c. 用吸水纸围绕样本周围吸取残留液体,盖上玻璃盖玻片用石蜡或指甲油封住盖玻片边缘。也可用抗荧光淬灭剂进行封片。
    d. 选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。


    相关产品

    40710ES03

    PI (Propidium iodide) 碘化丙啶染液(1mg/ml)

    1 mL

    40732ES03

    Hoechst 33342 染液(1mg/ml)

    1 mL

    40744ES01

    Hoechst 33342/PI 双染试剂盒

    1 Kit

    40730ES03

    Hoechst 33258 染液(1mg/ml)

    1 mL

    40745ES01

    Hoechst 33452/PI 双染试剂盒

    1 Kit

    40728ES03

    DAPI染液(5mg/ml)

    1 mg

    40747ES01

    Calcein-AM/PI检测试剂盒

    1 Kit